人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞永生化的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝！
小楊 / 2024-12-26 08:42:48
一、細(xì)胞簡(jiǎn)介
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：永生化細(xì)胞
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
二、細(xì)胞詳述
Ⅱ型肺泡細(xì)胞（ATⅡ）又稱顆粒肺泡細(xì)胞，散在分布于ATⅠ肺泡細(xì)胞（ATⅠ）之間及其相鄰的肺泡間隔結(jié)合處。其體積較小，呈立方形，表面稍突向肺泡腔。細(xì)胞核大而圓，胞質(zhì)染色較淺淡，胞質(zhì)中常見(jiàn)空泡。數(shù)量較ATⅠ多，ATⅡ占肺泡上皮細(xì)胞總數(shù)的14%到16%，但僅覆蓋5℅的肺泡表面。ATⅡ體積比ATⅠ小很多，人約為900um3 .在細(xì)胞游離面有較多的短微絨毛，尤其在細(xì)胞邊緣部更多。細(xì)胞表面有 MPA凝集素，對(duì)α-半乳糖殘基有特異性反應(yīng)。相鄰細(xì)胞以緊密連接或中間連接相連，胞質(zhì)內(nèi)有較多的線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，還有多泡體、溶酶體和板層體。ATⅡ是肺泡上皮細(xì)胞的“干細(xì)胞”，它的功能多樣：能增殖成新的ATⅡ，還可以分化為其他上細(xì)胞如ATⅠ；合成和分泌表面活性物質(zhì)的功能；肺水轉(zhuǎn)運(yùn)功能；強(qiáng)大的免疫功能。這些功能與以下疾病有密不可分的關(guān)系。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40基因。
三、細(xì)胞特性
1)細(xì)胞來(lái)源于人肺組織。
2)細(xì)胞鑒定：肺表面活性蛋白 A（SP-A）或肺表面活性蛋白 C（SP-C）免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
四、產(chǎn)品的運(yùn)輸和保存
視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。
1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。
五、推薦培養(yǎng)基
我們推薦使用人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞-永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基作為體外培養(yǎng)人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞永生化的培養(yǎng)基。
六、產(chǎn)品使用
1)本產(chǎn)品僅能用于科研
2)本產(chǎn)品未通過(guò)直接用于活體動(dòng)物和人的審核
3)本產(chǎn)品未通過(guò)用于活體診斷的審核
七、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
2、細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入250px皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3、按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4、將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
注：第一次傳代推薦傳代比例為1:2，以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。
下面T25瓶為例；
1、細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
八、注意事項(xiàng)
1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2、收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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