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蜂蜜曲霉是殼霉目杯霉科真菌。菌落在查氏瓊臘上25℃12天直徑50-56mm，氣生菌絲少，邊緣埋生型菌絲超越菌落面達(dá)4-5mm；菌落在麥芽汁瓊脂上25℃12天直徑70mm,中部較厚，質(zhì)地絮狀,有較多的分生孢子結(jié)構(gòu)，微褐赭黃色，近于蜜黃色（Honey yellow，R. XXX）。

 

平臺(tái)編號(hào)：Bio-65607 

提供形式：凍干物

拉丁屬名：Aspergillus Melleus 

中文名稱(chēng)：蜂蜜曲霉

屬名：Aspergillus

種名加詞：melleus

其它中心編號(hào)：=IFO 4346

來(lái)源歷史：←上海市工業(yè)微生物研究所(M267) ←日本IFO

收藏時(shí)間：2005.11.25

資源歸類(lèi)編碼：15151913102

模式菌株：非模式菌株

主要用途：研究；生產(chǎn)

具體用途：轉(zhuǎn)化孕甾酮為11α羥基。

特征特性：菌落稍呈局限形，赭色或淺黃色，基內(nèi)菌絲無(wú)色或具不同程度的黃色，反面帶黃褐色至綠褐色。分生孢子穗初球形，后裂成更多的直柱狀團(tuán)塊；分生孢子梗黃色，有麻點(diǎn)；頂囊球形，壁厚，全部可孕；小梗雙層，密集；分生孢子近球形，常略粗糙。    

生物危害程度：四類(lèi)

致病對(duì)象：無(wú)

培養(yǎng)基：馬鈴薯提取液 1.0L，葡萄糖 20.0g，瓊脂 15.0g，pH自然。[注] 馬鈴薯提取液：取去皮馬鈴薯200g，切成小塊，加水1.0L煮沸30min，濾去馬鈴薯塊，將濾液補(bǔ)足至1.0L。

培養(yǎng)溫度：28℃

資源保藏類(lèi)型：培養(yǎng)物

保存方法：真空冷凍干燥法

實(shí)物狀態(tài)：有實(shí)物

共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享

源數(shù)據(jù)主鍵：40330

用途：研究；生產(chǎn)；轉(zhuǎn)化孕甾酮為11α羥基。 

注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類(lèi)或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）

 

菌落在查氏瓊臘上25℃12天直徑50-56mm，氣生菌絲少，邊緣埋生型菌絲超越菌落面達(dá)4-5mm；有大量的菌核而使菌落面呈顆粒狀，初為粉紅色，后變成黃色、微褐黃色，近于銻黃色（Antimony Yellow，R. XV），或赭黃褐色（Ochraceous-Tawny ，R. XV），并有光澤；分生孢子結(jié)構(gòu)少，不影響菌落外觀，但中心相對(duì)較多，淡黃色，近于暖淺黃色（Warm Buff，R. XV）或淺赭鮭色（Light Ochraceous-Salmon, R. XV）；無(wú)滲出液；無(wú)氣味；菌落反面淺褐黃到紫褐色。分生孢子頭幼時(shí)呈放射狀到近球形，直徑達(dá)200μm，老時(shí)大頭裂成幾個(gè)柱狀體，小頭呈疏松的圓柱狀或松散；分生孢子梗多發(fā)生于氣生菌絲，少發(fā)生于基質(zhì)，孢梗莖（150-）200-500μm×（3.2）5.0-9.0（-12）μm，大者直，小者彎曲，平滑或粗糙，老時(shí)均粗糙且呈褐色；頂囊球形，近球形或稍長(zhǎng)形，直徑8-20（-28）μm，大者全部表面可育，小者二分之一的表面或僅頂部可育；產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)雙層：?；?.0-24μm×2.5-12μm，瓶梗6.0-8．0μm×2.0-2.5μm；分生孢子多橢圓形，少球形或近球形，3.0-3.5μm×2.2-2.8μm，壁平滑；菌核近球形到橢圓形，500-800μm×400-650μm。

在查氏酵母膏瓊脂上25℃ 7大直徑45-50mm，具少量放射狀溝紋或平坦，中心有凸起，產(chǎn)生大量的菌核而呈顆粒狀，紅褐色，近于赭黃褐到肉桂褐色，（Ohraceous-Tawny- Cinnamon Brown，R. XV）；分生孢子結(jié)構(gòu)稀少，不影響菌落外觀，在中心部分相對(duì)較多，淺黃色，近于肉桂淡黃色（Cinnamon，Buff，R， XXIX）；無(wú)滲出液；無(wú)氣味；菌落反面紫紅色。

菌落在麥芽汁瓊脂上25℃12天直徑70mm,中部較厚，質(zhì)地絮狀,有較多的分生孢子結(jié)構(gòu)，微褐赭黃色，近于蜜黃色（Honey yellow，R. XXX）；邊緣分生孢子結(jié)構(gòu)少，但有較多的菌核散生于基質(zhì)表面，帶赭黃色；無(wú)滲出液；具霉味，反面黃褐色。

 

⑴ 放線(xiàn)菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過(guò)0.5%),碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境,不利于放線(xiàn)菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線(xiàn)菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃,少數(shù)為37 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為5~14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類(lèi)培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時(shí)間為4~14天。

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐,常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng),有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過(guò)程,因菌種不同而異,一般可分為一級(jí)種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱(chēng)為一級(jí)種子,把一級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為二級(jí)發(fā)酵。如果將一級(jí)種子接入體積較大的種子罐內(nèi),經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱(chēng)為二級(jí)種子,將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵,稱(chēng)為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理,使用三級(jí)種子的發(fā)酵,稱(chēng)為四級(jí)發(fā)酵。

 

1、稱(chēng)量→溶化→調(diào)pH→過(guò)濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無(wú)菌檢查 

2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開(kāi)箱取物 

3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無(wú)菌檢查 

4、過(guò)濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無(wú)菌檢查→清洗滅菌

 

1、傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細(xì)菌用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2、液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3、載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4、寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲(chóng)、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5、冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6、冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。保護(hù)性溶質(zhì)可通過(guò)氫和離子鍵對(duì)水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親和力來(lái)穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。保護(hù)劑有牛乳、血清、糖類(lèi)、甘油、二甲亞砜等。

 

1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預(yù)留，用無(wú)菌吸管吸取 0.3- 0.5ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無(wú)菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過(guò) 2 個(gè)平板，操作完畢后盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；若需接種液體培養(yǎng)基，制作培養(yǎng)液時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)液中的氧氣）；操作完畢盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；若需要液體培養(yǎng)，制作培養(yǎng)液時(shí)，應(yīng)使用厭氧螺口試管，并利用高純氮?dú)馊コ嚬芎团囵B(yǎng)液中的氧氣。 經(jīng)過(guò)冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng)，這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間；若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn)，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)；如有不明白之處，請(qǐng)務(wù)必先咨詢(xún)我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；

2）微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退；

3）菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行；轉(zhuǎn)種完畢，應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理；

4）應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年；

5）菌種使用過(guò)程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降，應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)聯(lián)系。

6）如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請(qǐng)?jiān)谑盏骄姾?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理；

7） 打管操作需由專(zhuān)業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類(lèi)的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。

8）安瓿瓶開(kāi)封：用浸過(guò) 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開(kāi)口處在火焰上過(guò)一遍，并保持在火焰旁操作。

 

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