ATCC 33241 生癌腸桿菌的微生物培養(yǎng)方法及打管說明！
小楊 / 2024-12-27 09:12:02
生癌腸桿菌，原產(chǎn)中國，主要用于分類、研究。保存方法有液氮超低溫凍結法，-80℃冰箱凍結法，真空冷凍干燥法。
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干粉
拉丁屬名：Enterobacter Cancerogenus
拉丁名稱：Enterobacter cancerogenus
其它保藏中心編號：=DSM 17580=
ATCC 33241=CCM 2421=LMG 2693=NCPPB 2176
來源歷史：←DSMZ←NCPPB
收藏時間：2016/6/15
原始編號：A-1, PDDCC 5706
原產(chǎn)國：捷克斯洛伐克
資源歸類編碼：15131122105
模式菌株：模式菌株
主要用途：分類；研究
特征特性：雙倍乳糖膽鹽培養(yǎng)基中44.5℃培養(yǎng)不生長。在伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基上的菌落白色至淺粉色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤。16S rRNA 基因序列號：Z96078。
具體用途：分類學研究。
生物危害程度：四類
培養(yǎng)基編號：CM0847
培養(yǎng)基名稱：胰蛋白胨大豆瓊脂（TSA）(CAIQ0701)
培養(yǎng)基成分：胰蛋白胨 15.0g，大豆胨 5.0g，氯化鈉 5.0g，瓊脂 13.0 g，蒸餾水 1.0L，pH7.3±0.2。
培養(yǎng)溫度：30℃
需氧類型：好氧
分離基物：加拿大楊樹再生變種潰瘍
保存方法：-80℃冰箱凍結法；真空冷凍干燥法
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
提供形式：凍干物
用途：分類學研究。
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、產(chǎn)品特點
1、菌種功能明確、品種穩(wěn)定、應用效果顯著；
2、本品芽孢含量高，穩(wěn)定性好、耐高溫和擠壓；
3、繁殖能力快、定植能力強、易存活、耐受低pH值環(huán)境；
4、復活迅速，可在短期內(nèi)成為優(yōu)勢種群；
5、本品安全高效、無抗藥性、不污染環(huán)境；
6、對多數(shù)抗生素不敏感，可與低濃度抗革蘭氏陰性菌抗生素同時使用。
三、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種(一級種)、原種(二級種)和栽培種(三級種)三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種,其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種,也稱種子制備,是指菌種在一定條件下,經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質量的純 菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的菌種,用無菌手續(xù)挑取少許,接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上,在25℃(或較高溫度)下培養(yǎng)5~7天(或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子(對于霉菌類孢子制備,多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基)。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液,接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上,于25~28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在 上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些菌種不產(chǎn)孢子,如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的,則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體,作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源(如葡萄糖)和氮源(如玉米漿),及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯,無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%~20%。
四、保藏條件
斜面菌種和凍干菌種應在 2-8°C 保存。西林瓶菌種請置于-20°C 保存。
五、注意事項
1) 首次活化，用盡量少的復水液溶解，接種在 5ml 的液體培養(yǎng)基中，靜止培養(yǎng)，如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；二次接種量要多，固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長得比較明顯，液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng)；
2）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
3）菌種操作應在無菌條件下進行；轉種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應根據(jù)菌種狀況及時轉接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
六、單層安瓿瓶凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
2、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在 4-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥并抽真空保存的，開啟后必須一次使用完，不能留菌粉下次使用；另外，安瓿管里大部分是用牛奶作為保護劑，里面菌體為少數(shù)，復蘇時要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復蘇不成功；
3、凍干菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，有時延滯期較長，如在說明書建議的培養(yǎng)時間還未長起來，請繼續(xù)在相應的環(huán)境下多培養(yǎng) 24 小時或者更長時間，直至菌種培養(yǎng)完成；有的菌種需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長，一般來說菌種穩(wěn)定后才能用于您的后續(xù)實驗。
4、暫不啟開的安瓿管應于 4℃中保藏（特殊除外）。
5、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
6、打管操作需由專業(yè)微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
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