紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基的適用性檢查與實驗方法！
小楊 / 2024-12-27 09:26:45
一、培養(yǎng)基原理
明膠胰酶水解物提供微生物生長所需的基本氮源和碳源，酵母浸出粉提供細菌生長所需的維生素等，葡萄糖提供碳源，結(jié)晶紫與脫氧膽酸鈉聯(lián)合可抑制多數(shù)革蘭氏陽性細菌生長，氯化鈉提供適宜的生理環(huán)境，中性紅為酸堿指示劑，酸性變紅，堿性變黃，瓊脂為凝固劑。
細菌利用葡萄糖會產(chǎn)酸使pH下降，在中性紅與結(jié)晶紫聯(lián)合著色的作用下使菌落呈紫紅色，同時利用葡萄糖產(chǎn)生的酸與脫氧膽酸鈉反應(yīng)形成沉淀，從而在菌落周圍形成不透明沉淀圈。
二、所需菌種
大腸埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]
金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]
銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]
三、檢查項目
促生長能力、指示能力、抑制能力（此項建議添加）
四、檢查方法
平皿涂布法，同步使用對照培養(yǎng)基與待檢培養(yǎng)基
五、菌液制備與稀釋
挑取四代以內(nèi)（含四代）上述菌種的新鮮培養(yǎng)物至胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，30～35℃培養(yǎng)18～24h，使用pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液或0.9%氯化鈉溶液進行十倍稀釋，制成每0.1ml含小于100cfu的菌懸液(稀釋梯度：通常情況下為10-6)。金黃色葡萄球菌稀釋成每0.1ml含不少于100cfu的菌懸液(稀釋梯度：通常情況下為10-5)
六、培養(yǎng)基制備
被檢培養(yǎng)基：稱取培養(yǎng)基8.3g于200ml純化水中,攪拌加熱煮沸一分鐘使完全溶解(如有浮沫，使用藥匙置輕輕撇去)，冷至50℃左右傾注平板(每皿20ml左右)
對照培養(yǎng)基：按照說明書中的比例稱取，其它步驟同上。
將制備好的平板做好標記，條件允許的話置于30～35℃培養(yǎng)箱中預(yù)置約2～4h，目的是消除瓊脂表面多余的水分，以便涂布操作。
七、實驗方法
1、培養(yǎng)基陽性組：
（1）
大腸埃希氏菌、
銅綠假單胞菌：取稀釋后的菌懸液0.1ml加于預(yù)制的平板中，涂布均勻（涂布操作注意避免菌液過多的存在于平皿邊緣，當涂布過程感覺平板表面比較干燥時即認為涂布完成）。每種試驗菌各做2個平行對照。
（2）
金黃色葡萄球菌：取稀釋后的菌懸液0.1ml加于預(yù)制的平板中，涂布均勻，做一個平板即可，用于抑制能力檢查。
2、培養(yǎng)基陰性組：待檢培養(yǎng)基與對照培養(yǎng)基，同時各做一個空白對照，即不添加菌液。
3、對照培養(yǎng)基與被檢培養(yǎng)基接種方法均按照上述說明操作，同時在平皿底部做好分類標記。
4、置30～35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24h。
5、計數(shù)并觀察菌落特征。
八、計算方法
回收率/生長率＝（被檢培養(yǎng)基陽性組平均菌落數(shù)—被檢培養(yǎng)基陰性組平均菌落數(shù)）/（對照培養(yǎng)基陽性組平均菌落數(shù)—對照培養(yǎng)基陰性組平均菌落數(shù)）×100%。
九、判定依據(jù)
若生長率在0.5～2.0，且菌落形態(tài)大小應(yīng)與對照培養(yǎng)基一致，則判定合格。
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