奧哈芽孢桿菌：具體用途為潛在的有機污染物降解菌
小楊 / 2025-01-03 09:17:15
奧哈芽孢桿菌是Bacillus屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。產(chǎn)芽孢革蘭氏陽性桿菌。主要用途為研究。具體用途為潛在的有機污染物降解菌/分離自草甘膦富集菌群。
一、菌種簡介
提供形式：凍干物
拉丁屬名：Bacillus Okhensis
拉丁學名：Bacillus okhensis
原始編號：ZJ1227
菌株來源：←國家海洋局第二海洋研究所
保藏人：許學偉
直接來源國家：中國
保藏時間：9/17/2008
其他保藏編號
生物危害：四類
模式菌株：非模式菌株
菌株用途：研究
培養(yǎng)溫度：28℃
培養(yǎng)基：0223
其他培養(yǎng)條件
分離源：海水
采集地點：東海
采集國家：中國
用途：教學，研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、培養(yǎng)方法
1、菌種是指食用菌菌絲體及其生長基質組成的繁殖材料。菌種分為母種（一級種）、原種（二級種）和栽培種（三級種）三級。工業(yè)發(fā)酵的有用菌種，其篩選步驟包括菌種分離、初篩和復篩。
2、挑選具有某種能力的有用菌種，也稱種子制備，是指菌種在一定條件下，經(jīng)過擴大培養(yǎng)成為具有一定數(shù)量和質量的純生產(chǎn)菌種的制備過程。以作接入發(fā)酵罐中進一步擴大菌體量及合成產(chǎn)物之用。
3、種子制備包括孢子制備和菌絲體制備菌種制備。
4、保存在沙土管或冷凍管中的生產(chǎn)菌種，用無菌手續(xù)挑取少許，接入瓊脂斜面培養(yǎng)基上，在25℃（或較高溫度）下培養(yǎng)5～7天（或較長時間。所得孢子還需進一步用較大表面積的固體培養(yǎng)基以獲得更多孢子（對于霉菌類孢子制備，多數(shù)采用大米、小米之類的天然培養(yǎng)基）。
5、將培養(yǎng)成熟的斜面孢子制成懸浮液，接種到扁瓶固體培養(yǎng)基上，于25～28℃培養(yǎng)14天。將成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中備用。一次制得的孢子瓶可在生產(chǎn)上延續(xù)使用半年左右。
6、如果有些生產(chǎn)菌種不產(chǎn)孢子，如赤霉素產(chǎn)生菌或產(chǎn)孢子不多的，則可采用搖瓶液體培養(yǎng)制得菌絲體，作種子罐的種子。種子罐的目的是使接入有限的孢子或菌絲體迅速發(fā)芽、生長、繁殖成大量菌體。其中的培養(yǎng)基組分應是易于被菌體利用的碳源（如葡萄糖）和氮源（如玉米漿），及無機鹽(如磷酸鹽)等。作為發(fā)酵罐的種子應生命力旺盛、染色深、菌絲粗壯，無雜菌及異常菌體。接種量一般在10%～20%。
三、實驗內(nèi)容
1、稱量→溶化→調ph→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌：裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌：加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌：組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、使用范圍
（1）合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基的各種成分完全是已知的各種化學物質。這種培養(yǎng)基的化學成分清楚，組成成分精確，重復性強，而且微生物在這類培養(yǎng)基中生長較慢。如高氏一號合成培養(yǎng)基、察氏（Czapek）培養(yǎng)基等。
（2）天然培養(yǎng)基。由天然物質制成，如蒸熟的馬鈴薯和普通牛肉湯，前者用于培養(yǎng)霉菌，后者用于培養(yǎng)細菌。這類培養(yǎng)基的化學成分很不恒定，也難以確定，但配制方便，營養(yǎng)豐富，培養(yǎng)效果好，所以常被采用。
（3）半合成培養(yǎng)基。在天然有機物的基礎上適當加入已知成分的無機鹽類，或在合成培養(yǎng)基的基礎上添加某些天然成分，如培養(yǎng)霉菌用的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。這類培養(yǎng)基能更有效地滿足微生物對營養(yǎng)物質的需要。
五、保藏方法
1、傳代培養(yǎng)保藏法
又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧細菌用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。
2、液體石蠟覆蓋保藏法
是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當延長保藏時間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋滅菌的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進入，以減弱代謝作用。
3、載體保藏法
是將微生物吸附在適當?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應用相當廣泛。
4、寄主保藏法
用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進行保藏。
5、冷凍保藏法
可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。
6、冷凍干燥保藏法
先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護劑來制備細胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對細胞的損害。保護性溶質可通過氫和離子鍵對水和細胞所產(chǎn)生的親和力來穩(wěn)定細胞成分的構型。保護劑有牛乳、血清、糖類、甘油、二甲亞砜等。
六、注意事項
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預留，用 0.1-0.2ml 的培養(yǎng)液或無菌水溶解，接種在 2 支斜面上，因凍干粉處于休眠狀態(tài)，請勿接種多支斜面或平板，以避免因接種量不足而導致復蘇不成功；如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；
2）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
3）菌種操作應在無菌條件下進行；轉種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
4）應根據(jù)菌種狀況及時轉接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
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