微生物菌種查詢網(wǎng)推薦的穿刺保藏法適用于哪些微生物？
小楊 / 2025-02-27 09:29:00
微生物菌種查詢網(wǎng)推薦的穿刺保藏法主要適用于兼性厭氧細(xì)菌，特別是工程大腸桿菌等實驗室常用菌株。
該方法通過半固體培養(yǎng)基限制氧氣擴散，減緩代謝速率，具體適用性如下：
1、核心適用對象
革蘭氏陰性菌：大腸桿菌（如DH5α、BL21等基因工程菌）
通過穿刺至半固體瓊脂（濃度0.6%-0.8%）中，4℃下可保存6-12個月（參考"半固體穿刺保藏法"描述）。
穿刺深度需達(dá)試管3/4處，避免接觸底部氧氣，適合保存1年以上（結(jié)合"液體石蠟覆蓋保藏法"與"穿刺法"要點）。
2、不適用的情況
嚴(yán)格需氧菌（如枯草芽孢桿菌）：穿刺環(huán)境缺氧易導(dǎo)致死亡
嚴(yán)格厭氧菌（如產(chǎn)氣莢膜梭菌）：需額外添加還原劑（如0.1%半胱氨酸）
3、操作關(guān)鍵參數(shù)
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4、改良應(yīng)用
聯(lián)合石蠟密封：穿刺后覆蓋無菌液體石蠟（厚度≥1cm），可使保存期從1年延長至2-3年（如傷寒桿菌保藏案例）。
特殊菌株處理：對溶血性鏈球菌等營養(yǎng)要求高的菌種，需在培養(yǎng)基中添加5%脫纖維羊血。
5、與其他方法對比
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穿刺保藏法的核心優(yōu)勢在于操作簡便（無需特殊設(shè)備）與穩(wěn)定性平衡（變異率低于斜面法的15%），特別適合需要頻繁使用的工程菌株。實際應(yīng)用中，建議每6個月通過16S rRNA測序驗證菌種遺傳穩(wěn)定性（參考"保藏質(zhì)量控制"要求）。
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