流式細胞術的實驗原理與技術特點及核心應用領域！
小楊 / 2025-04-12 09:39:32
流式細胞術（Flow Cytometry）是一種通過檢測懸浮細胞或微粒的物理和化學特性，進行快速、多參數(shù)定量分析的技術。其核心原理基于細胞在液流中單列通過檢測區(qū)時，與激光相互作用產生的光信號，結合熒光標記技術對細胞進行識別和分析。以下是其詳細實驗原理：
一、樣本制備
單細胞懸液：待測樣本（如血液、培養(yǎng)細胞、組織消化液等）需制備為單個分散的細胞懸液，避免細胞團塊干擾檢測。
熒光標記：用熒光染料偶聯(lián)的抗體或熒光探針標記目標分子（如細胞表面蛋白、胞內因子、DNA含量等）。不同熒光染料對應不同檢測通道（如FITC、PE、APC等）。
二、液流系統(tǒng)與細胞排列
鞘液與層流：樣本液被鞘液（無細胞緩沖液）包裹，通過流體動力學聚焦技術形成單細胞流。鞘液的高流速迫使細胞在流動室中排列成單列，逐個通過檢測點（類似“細胞排隊”）。
三、激光激發(fā)與光信號產生
激光照射：單列細胞流經一束或多束激光（常見波長：488nm藍激光、633nm紅激光等），細胞與激光相互作用產生兩種信號：
散射光：
前向散射光（FSC）：反映細胞大小或體積。
側向散射光（SSC）：反映細胞內部復雜度（如顆粒度、核形）。
熒光信號：細胞上的熒光標記被激發(fā)后發(fā)射特定波長的熒光，反映目標分子的表達水平（如CD3、CD4等抗原）。
四、信號檢測與分選
光學系統(tǒng)：
光電檢測器：散射光由光電二極管（FSC）和光電倍增管（SSC/熒光）接收。
濾光片系統(tǒng)：通過分光鏡和帶通濾光片分離不同波長的熒光信號（如FITC：530/30nm，PE：575/26nm）。
數(shù)據(jù)轉換：光信號轉換為電信號，經數(shù)字化處理后生成數(shù)值（如熒光強度、散射光強度）。
細胞分選（可選）：在流式分選儀（FACS）中，通過液滴充電和偏轉電場分離目標細胞。
五、數(shù)據(jù)分析
多參數(shù)分析：通過軟件（如FlowJo、BD FACSDiva）對數(shù)據(jù)進行可視化（散點圖、直方圖、等高線圖等），結合設門（Gating）策略區(qū)分細胞亞群。
例如：通過FSC/SSC區(qū)分活細胞與碎片，通過CD4+/CD8+熒光標記分析T細胞亞群。
六、核心應用領域
免疫表型分析：如淋巴細胞亞群（CD4+、CD8+ T細胞）檢測。
細胞功能研究：胞內細胞因子、鈣離子濃度、細胞凋亡（Annexin V/PI）檢測。
DNA含量與細胞周期分析：碘化丙啶（PI）標記DNA分析G0/G1、S、G2/M期。
稀有細胞分選：如干細胞、循環(huán)腫瘤細胞（CTC）分選。
七、技術特點
高通量：每秒可檢測數(shù)千至上萬個細胞。
多參數(shù)：同時檢測多個熒光標記（現(xiàn)代儀器可達20+參數(shù)）。
定量與定性結合：提供熒光強度、細胞比例、絕對計數(shù)等數(shù)據(jù)。
高靈敏度：可檢測低表達分子或稀有細胞（＜0.01%）。
流式細胞術通過整合流體力學、光學、電子學和生物標記技術，實現(xiàn)了對細胞群體的精準解析，是現(xiàn)代免疫學、腫瘤學、血液學研究的重要工具。
北京百歐博偉生物技術有限公司的
微生物菌種查詢網提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務,是中國微生物菌種保藏中心的服務平臺，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網站，自設設備及技術的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：單細胞組織解離的實驗方法與實驗步驟及注意事項！
下一篇：H9c2大鼠心肌細胞的培養(yǎng)條件與分化誘導及應用領域！