甘油生化管的使用方法與操作步驟及常見問題與應(yīng)用場(chǎng)景！
小楊 / 2025-05-15 09:30:13
百歐博偉生物：甘油生化管（通常稱為甘油保存管或甘油菌種保存管）是微生物學(xué)中用于長(zhǎng)期保存菌種的常用工具。其原理和使用方法如下：
一、原理
1、冷凍保護(hù)作用：
甘油（濃度15-30%）作為冷凍保護(hù)劑，能降低水的冰點(diǎn)，減少低溫（如-80°C）冷凍時(shí)冰晶的形成，避免冰晶刺破細(xì)胞膜，從而保護(hù)微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性。
2、抑制代謝與脫水：
高濃度甘油滲透到細(xì)胞內(nèi)部，降低細(xì)胞質(zhì)的水分活度，抑制代謝活動(dòng)，使微生物進(jìn)入休眠狀態(tài)，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期保存。
二、使用方法
1、準(zhǔn)備工作
材料：無菌甘油（濃度50%-80%，需高壓滅菌或過濾除菌）、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌液、無菌凍存管、移液器、標(biāo)簽等。
甘油的滅菌：
高壓滅菌（121°C, 15分鐘）可能導(dǎo)致甘油分解，推薦使用0.22μm濾膜過濾除菌。
2、操作步驟
混合菌液與甘油：
將菌液與滅菌甘油按比例混合（例如：700μL菌液 + 300μL 50%甘油），最終甘油濃度為15%-20%。
震蕩混勻，避免氣泡。
分裝與標(biāo)記：
將混合液分裝至無菌凍存管（每管0.5-1mL），標(biāo)注菌株名稱、日期等信息。
冷凍保存：
立即置于-80°C超低溫冰箱保存。避免反復(fù)凍融，否則會(huì)降低存活率。
3、復(fù)蘇菌種
用接種環(huán)刮取少量?jī)鼋Y(jié)菌液，直接劃線接種至固體培養(yǎng)基，或融化后取少量液體接種。
三、注意事項(xiàng)
1、菌液狀態(tài)：使用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的菌體（活力最強(qiáng)）。
2、甘油濃度：
濃度過高（>30%）可能產(chǎn)生毒性，過低則保護(hù)不足。
3、無菌操作：全程需在超凈臺(tái)操作，避免污染。
4、分裝量：小體積分裝（如1mL/管），避免反復(fù)凍融。
5、標(biāo)簽清晰：標(biāo)注菌株名稱、保存日期、濃度等關(guān)鍵信息。
四、常見問題
1、存活率低：可能因甘油濃度不當(dāng)、菌種狀態(tài)差或反復(fù)凍融導(dǎo)致。
2、污染：操作環(huán)境或甘油滅菌不徹底。
3、無法復(fù)蘇：保存溫度不穩(wěn)定（如-20°C不適用長(zhǎng)期保存）。
五、應(yīng)用場(chǎng)景
實(shí)驗(yàn)室長(zhǎng)期保存細(xì)菌、酵母、真菌等微生物菌種。
用于建立菌種庫或備份重要實(shí)驗(yàn)菌株。
通過正確使用甘油生化管，微生物菌種通?？杀４鏀?shù)年甚至數(shù)十年。若涉及特殊菌種（如嚴(yán)格厭氧菌），需根據(jù)其特性調(diào)整保存方法。
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