耐熱大腸菌群數(shù)的檢測方法之傳統(tǒng)培養(yǎng)法和快速檢測法！
小楊 / 2025-08-19 08:51:35
耐熱大腸菌群數(shù)的檢測方法主要基于其在特定溫度（通常為 44.5℃）下生長繁殖的特性，通過培養(yǎng)、觀察特征性反應(yīng)來計數(shù)或定性判斷。常見方法可分為傳統(tǒng)培養(yǎng)法和快速檢測法，具體如下：
一、傳統(tǒng)培養(yǎng)法（國標(biāo)常用方法）
這類方法通過培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)和生化反應(yīng)驗證，操作相對經(jīng)典，結(jié)果可靠性高，是多數(shù)國家標(biāo)準(zhǔn)的指定方法。
1、多管發(fā)酵法
原理：利用不同濃度的水樣接種到含乳糖的選擇性培養(yǎng)基（如乳糖蛋白胨培養(yǎng)液）中，在 44.5℃±0.5℃條件下培養(yǎng)，觀察是否產(chǎn)酸產(chǎn)氣（提示耐熱大腸菌群存在），再通過統(tǒng)計學(xué)查表（最可能數(shù)法，MPN 法）計算水樣中耐熱大腸菌群的數(shù)量（單位：MPN/100mL）。
步驟：
取不同體積的水樣（如 10mL、1mL、0.1mL 等）分別接種到多組發(fā)酵管中；
44.5℃培養(yǎng) 24~48 小時，觀察產(chǎn)酸產(chǎn)氣情況（初發(fā)酵）；
對陽性管轉(zhuǎn)種到
伊紅美藍瓊脂（EMB）或遠藤瓊脂等選擇性培養(yǎng)基上，44.5℃培養(yǎng)后觀察菌落形態(tài)（復(fù)發(fā)酵）；
結(jié)合生化試驗（如靛基質(zhì)試驗）確認(rèn)，最終根據(jù)陽性管數(shù)量查 MPN 表得出結(jié)果。
適用場景：適用于各類水樣（如飲用水、地表水等），尤其適合渾濁或含雜質(zhì)較多的水樣，但操作較繁瑣，耗時較長（需 3~5 天）。
2、濾膜法
原理：將水樣通過孔徑為 0.45μm 的濾膜過濾，截留水中的耐熱大腸菌群；將濾膜置于選擇性培養(yǎng)基上，44.5℃培養(yǎng) 24~48 小時，計數(shù)特征菌落（如 MFC 瓊脂上呈藍色或藍綠色的菌落）。
步驟：
水樣過濾后，將濾膜正面朝上貼在 MFC 瓊脂平板上；
44.5℃培養(yǎng)后，直接計數(shù)符合耐熱大腸菌群特征的菌落數(shù)，結(jié)果以“個 / 100mL”表示。
適用場景：適用于較清潔的水樣（如飲用水、經(jīng)過處理的污水），操作相對簡便，可直接計數(shù)菌落，結(jié)果直觀，但對渾濁或含懸浮顆粒多的水樣易堵塞濾膜，影響檢測。
二、快速檢測法（現(xiàn)代技術(shù)輔助方法）
這類方法通過生化反應(yīng)顯色、分子生物學(xué)或儀器分析等技術(shù)，縮短檢測時間，提高效率，適用于快速篩查或批量檢測。
1、酶底物法
原理：利用耐熱大腸菌群含有的 β- 半乳糖苷酶，可分解特定底物產(chǎn)生顯色或熒光物質(zhì)，通過顏色變化或熒光強度判斷是否存在該菌群，并可通過定量接種計算數(shù)量。
特點：操作簡便，無需轉(zhuǎn)種和生化試驗，44.5℃培養(yǎng) 24 小時內(nèi)即可判斷結(jié)果，適用于現(xiàn)場快速檢測或大量樣本篩查，部分方法已被納入國標(biāo)。
2、免疫學(xué)法
原理：利用特異性抗體與耐熱大腸菌群的抗原結(jié)合，通過酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）或免疫熒光技術(shù)，定性或定量檢測目標(biāo)菌群。
特點：特異性較高，檢測時間可縮短至數(shù)小時，但成本較高，易受交叉反應(yīng)影響，適用于應(yīng)急檢測。
3、分子生物學(xué)方法
原理：通過聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴增耐熱大腸菌群特有的基因片段，通過擴增產(chǎn)物的有無或濃度判斷菌群存在及數(shù)量（實時熒光 PCR 可定量）。
特點：靈敏度極高，可在數(shù)小時內(nèi)完成檢測，能區(qū)分不同菌種，但對操作環(huán)境和技術(shù)要求高，易受抑制物干擾，常用于實驗室精確檢測或溯源分析。
4、儀器自動檢測法
原理：利用自動化微生物檢測系統(tǒng)（如基于濁度、代謝產(chǎn)物或熒光信號的檢測儀），結(jié)合特定培養(yǎng)基和溫度控制，自動監(jiān)測耐熱大腸菌群的生長曲線，實現(xiàn)快速定量。
特點：自動化程度高，減少人為誤差，可同時檢測多個樣本，適用于大型實驗室或批量檢測，但儀器成本較高。
三、方法選擇依據(jù)
國家標(biāo)準(zhǔn)要求：我國《生活飲用水標(biāo)準(zhǔn)檢驗方法》（GB/T 5750.12-2023）中，推薦多管發(fā)酵法、濾膜法和酶底物法作為
耐熱大腸菌群的檢測方法，可根據(jù)水樣類型和檢測需求選擇。
檢測目的：傳統(tǒng)方法適合精準(zhǔn)計數(shù)和官方檢測，快速方法適合應(yīng)急篩查或大規(guī)模樣本初篩。
水樣特性：清潔水樣優(yōu)先選濾膜法，渾濁水樣適合多管發(fā)酵法，快速檢測可選酶底物法或 PCR 法。
不同方法在靈敏度、特異性、耗時和成本上各有優(yōu)劣，實際應(yīng)用中需結(jié)合檢測需求和條件選擇合適的方法。
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