氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基的檢驗原理與使用方法及注意事項！
小楊 / 2025-09-04 09:17:01
氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基是在普通血瓊脂基礎(chǔ)上添加特定濃度氯化鈉（通常為 6.5%）制成的選擇性兼鑒別培養(yǎng)基，核心用途是篩選耐高鹽細菌（如
腸球菌、
葡萄球菌等），并通過“溶血反應(yīng)”鑒別細菌的產(chǎn)酶特性，廣泛應(yīng)用于臨床微生物檢驗和食品衛(wèi)生檢測。
一、檢驗原理
該培養(yǎng)基的設(shè)計基于細菌的耐高鹽特性和溶血能力兩大核心生理差異，原理可拆解為“營養(yǎng)供給”“選擇性抑制”“鑒別反應(yīng)”三部分：
1、營養(yǎng)供給：滿足細菌基礎(chǔ)生長需求
氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ)的“基礎(chǔ)成分”為細菌提供全面營養(yǎng)，與普通營養(yǎng)瓊脂類似，關(guān)鍵成分及作用如下：
核心成分 作用機制
胰蛋白胨/肉浸粉 提供蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物（氨基酸、短肽）、核苷酸等，作為細菌生長的氮源和碳源基礎(chǔ)
酵母浸粉 補充 B 族維生素（如維生素 B2、煙酸）、生長因子，促進營養(yǎng)苛求菌（如某些鏈球菌）增殖
葡萄糖 提供可發(fā)酵糖類，為細菌代謝提供能量（部分細菌可通過發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，輔助鑒別）
瓊脂 培養(yǎng)基凝固劑，提供固體生長表面，便于觀察菌落形態(tài)
2、選擇性抑制：篩選耐高鹽細菌
通過添加6.5% 高濃度氯化鈉，利用不同細菌對鹽濃度的耐受差異實現(xiàn)選擇性篩選：
多數(shù)非耐鹽細菌（如
大腸埃希菌、
肺炎克雷伯菌等腸桿菌科細菌）對高鹽敏感，6.5% 氯化鈉會破壞其細胞膜滲透壓平衡，導致細胞脫水破裂，無法生長；
耐高鹽細菌（如
腸球菌、
金黃色葡萄球菌、某些弧菌）可通過調(diào)節(jié)細胞內(nèi)滲透壓（如積累相容性溶質(zhì)）適應(yīng)高鹽環(huán)境，能在該培養(yǎng)基上正常繁殖，從而被篩選出來。
注：不同菌株耐鹽性存在差異，例如腸球菌對 6.5% 氯化鈉的耐受性強于鏈球菌（多數(shù)鏈球菌在該濃度下生長受抑），因此該培養(yǎng)基也是區(qū)分腸球菌與鏈球菌的重要工具之一。
3、鑒別反應(yīng)：通過溶血試驗區(qū)分細菌
培養(yǎng)基中添加的脫纖維羊血 / 兔血（通常為 5%~10%）不僅能補充營養(yǎng)（如血紅蛋白、生長因子），還可通過“溶血反應(yīng)”鑒別細菌是否產(chǎn)生溶血素（一種能破壞紅細胞的毒素），具體溶血類型及判斷標準如下：
溶血類型 原理 外觀特征（菌落周圍） 常見陽性菌舉例
α- 溶血（不完全溶血） 細菌產(chǎn)生的溶血素僅能部分破壞紅細胞，使血紅蛋白轉(zhuǎn)化為正鐵血紅蛋白 形成草綠色或灰綠色暈圈，紅細胞未完全溶解，暈圈內(nèi)仍可見未破裂的紅細胞 肺炎鏈球菌、草綠色鏈球菌
β- 溶血（完全溶血） 細菌產(chǎn)生的溶血素能完全破壞紅細胞和血紅蛋白 形成透明無色的溶血環(huán)，紅細胞完全溶解，培養(yǎng)基背景恢復為瓊脂本身的顏色 金黃色葡萄球菌、A 群鏈球菌
γ- 溶血（不溶血） 細菌不產(chǎn)生溶血素，無法破壞紅細胞 菌落周圍無任何顏色變化，紅細胞完整存在 腸球菌、表皮葡萄球菌
二、使用方法
1、培養(yǎng)基制備（以干粉基礎(chǔ)培養(yǎng)基為例）
稱量與溶解：按說明書比例（如 1000mL 蒸餾水加 40g 干粉基礎(chǔ)培養(yǎng)基），稱取干粉于蒸餾水中，攪拌至完全溶解（可加熱至沸騰助溶，確保無未溶顆粒，避免過度煮沸導致營養(yǎng)成分破壞）；
分裝與滅菌：將溶解后的基礎(chǔ)培養(yǎng)基分裝至錐形瓶，加蓋棉塞或硅膠塞，于121℃高壓蒸汽滅菌 15min（滅菌后需快速冷卻至 45~50℃，避免溫度過高破壞后續(xù)添加的血液成分）；
無菌添加血液：在無菌操作臺內(nèi)，向冷卻至 45~50℃的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入無菌脫纖維羊血 / 兔血（按 5%~10% 比例，如 100mL 基礎(chǔ)培養(yǎng)基加 5~10mL 血液），輕輕混勻（避免劇烈搖晃產(chǎn)生氣泡，影響菌落觀察）；
倒平板與保存：將含血液的培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿（每皿約 15~20mL），待其自然凝固（室溫靜置 30~60min，或 4℃冷藏 30min 加速凝固），制成平板。制備好的平板需4℃密封冷藏保存，有效期一般不超過 7 天，使用前需恢復至室溫。
2、樣本處理（以臨床標本為例，如尿液、傷口分泌物）
液體標本（如尿液）：若標本渾濁，可直接取 0.1mL 接種；若標本清亮，可先離心（3000rpm，5min），取沉淀（約 0.1mL）接種，提高檢出率；
固體標本（如傷口分泌物、糞便）：用無菌棉簽蘸取標本，在平板表面輕輕涂抹，或用無菌生理鹽水將標本制成 1:10 稀釋液后，取 0.1mL 接種；
食品標本（如肉制品）：稱取 10g 樣本，加入 90mL 無菌生理鹽水，振蕩混勻制成 1:10 稀釋液，再按 10 倍梯度稀釋至適宜濃度（如 10?²~10??，根據(jù)預期菌含量調(diào)整），取 0.1mL 稀釋液接種。
3、接種與培養(yǎng)
接種方式：
若需分離單菌落（如鑒別菌株類型），采用“涂布法”：取 0.1mL 處理后的樣本，滴加至平板表面，用無菌 L 型玻璃涂布棒均勻涂布整個平板，靜置 5~10min 讓液體吸收；
若需快速篩查（如判斷是否存在耐高鹽菌），可采用“劃線法”：用無菌接種環(huán)蘸取樣本，在平板上進行分區(qū)劃線，培養(yǎng)后觀察劃線區(qū)域的菌落生長情況。
培養(yǎng)條件：將接種后的平板放入36±1℃恒溫培養(yǎng)箱，需氧或微需氧培養(yǎng) 18~24h（多數(shù)耐高鹽菌為需氧或兼性厭氧菌，如腸球菌、葡萄球菌；若懷疑為微需氧菌，可在 5% 二氧化碳環(huán)境中培養(yǎng)）；若菌落生長緩慢，可延長培養(yǎng)至 48h。
4、結(jié)果觀察與判斷
培養(yǎng)結(jié)束后，根據(jù)“菌落生長情況”和“溶血類型”綜合判斷結(jié)果：
耐高鹽菌篩選結(jié)果：
陽性：平板上出現(xiàn)肉眼可見的菌落（無論溶血類型），說明樣本中存在耐高鹽細菌；
陰性：平板上無菌落生長或僅出現(xiàn)微小、稀疏的菌落（＜10 個），說明樣本中無耐高鹽菌或含量極低。
溶血類型鑒別：觀察陽性菌落周圍的溶血現(xiàn)象，結(jié)合菌落形態(tài)進一步判斷菌株種類：
若菌落為圓形、凸起、表面光滑，周圍有透明溶血環(huán)（β- 溶血），需警惕金黃色葡萄球菌（可進一步做凝固酶試驗確認）；
若菌落為圓形、邊緣整齊、乳白色，周圍無溶血環(huán)（γ- 溶血），可能為腸球菌（可進一步做膽汁七葉苷試驗確認）；
若菌落周圍出現(xiàn)草綠色溶血環(huán)（α- 溶血），可能為耐高鹽的草綠色鏈球菌（需結(jié)合生化反應(yīng)排除其他菌株）。
5、關(guān)鍵注意事項
血液添加的無菌性：脫纖維血液需經(jīng)無菌驗證，添加過程必須在無菌操作臺內(nèi)進行，避免血液污染導致培養(yǎng)基失效；
溫度控制：基礎(chǔ)培養(yǎng)基滅菌后冷卻至 45~50℃時才能添加血液，溫度過高會導致紅細胞破裂（出現(xiàn)“溶血背景”，干擾結(jié)果判斷），溫度過低則會導致培養(yǎng)基凝固，無法混勻；
培養(yǎng)基質(zhì)量驗證：每次使用前需做 3 項驗證：
無菌驗證：取空白平板培養(yǎng)，無任何菌落生長；
溶血結(jié)果判斷時機：培養(yǎng) 18~24h 后及時觀察，若培養(yǎng)時間過長，細菌代謝產(chǎn)物可能導致培養(yǎng)基顏色變化，干擾溶血環(huán)判斷。
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