流感嗜血桿菌的培養(yǎng)和鑒定需要注意的相關(guān)事項(xiàng)有哪些？
小楊 / 2025-09-09 09:30:47
流感嗜血桿菌的培養(yǎng)和鑒定過(guò)程中，由于其對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求特殊、形態(tài)及生化特性有一定特異性，需注意以下關(guān)鍵事項(xiàng)，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性：
一、培養(yǎng)相關(guān)注意事項(xiàng)
1、營(yíng)養(yǎng)條件的嚴(yán)格控制
流感嗜血桿菌生長(zhǎng)依賴(lài) X 因子（血紅素及其衍生物） 和 V 因子（煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，NAD），因此必須使用含這兩種因子的培養(yǎng)基，巧克力瓊脂平板是首選（通過(guò)加熱破壞紅細(xì)胞釋放 X 因子，并使 V 因子更易利用）。
避免使用普通血平板（未經(jīng)加熱的血平板中，紅細(xì)胞的 V 因子可能被破壞，且 X 因子釋放不足，導(dǎo)致細(xì)菌生長(zhǎng)不良）。
若進(jìn)行液體培養(yǎng)，可在肉湯中添加裂解紅細(xì)胞或補(bǔ)充 X、V 因子（如加入亞硫酸鈉處理的血或商業(yè)因子添加劑）。
2、培養(yǎng)環(huán)境的優(yōu)化
需氧或兼性厭氧，培養(yǎng)時(shí)需保持一定濕度（可在孵箱內(nèi)放置水盤(pán)），避免培養(yǎng)基干燥影響生長(zhǎng)。
最適溫度為 35~37℃，pH 7.6~7.8，溫度過(guò)高（>38.5℃）或過(guò)低（<35℃）會(huì)抑制生長(zhǎng)。
部分菌株可能需要 5%~10% CO?環(huán)境（尤其初代培養(yǎng)），可促進(jìn)其生長(zhǎng)（如腦膜炎患者的腦脊液標(biāo)本）。
3、標(biāo)本處理與接種時(shí)機(jī)
標(biāo)本采集后需 立即送檢，尤其是腦脊液、血液等易污染或細(xì)菌易死亡的標(biāo)本，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致細(xì)菌活力下降（
流感嗜血桿菌對(duì)干燥、低溫敏感）。
血液標(biāo)本需先接種于血培養(yǎng)瓶（含 X、V 因子或促生長(zhǎng)因子），經(jīng)增菌培養(yǎng)后再轉(zhuǎn)種至巧克力瓊脂；腦脊液標(biāo)本離心后取沉淀物接種，提高檢出率。
接種量需適當(dāng)，避免標(biāo)本中雜菌過(guò)度生長(zhǎng)抑制
流感嗜血桿菌（如呼吸道標(biāo)本中可能含大量其他細(xì)菌，需選擇性培養(yǎng)時(shí)可加入萬(wàn)古霉素等抑制革蘭氏陽(yáng)性菌）。
4、培養(yǎng)時(shí)間的把控
初代培養(yǎng)需觀(guān)察 24~48 小時(shí)，部分緩慢生長(zhǎng)菌株可能需要延長(zhǎng)至 72 小時(shí)，避免因培養(yǎng)時(shí)間不足而漏檢（早期菌落可能極小，易被忽略）。
二、鑒定相關(guān)注意事項(xiàng)
1、形態(tài)學(xué)觀(guān)察的準(zhǔn)確性
革蘭氏染色時(shí)需注意：
流感嗜血桿菌為革蘭氏陰性短小桿菌，但在陳舊培養(yǎng)物或膿性標(biāo)本中可能呈多形性（球桿狀、長(zhǎng)絲狀），易與其他革蘭氏陰性桿菌混淆，需結(jié)合培養(yǎng)特性綜合判斷。
莢膜染色僅對(duì)有莢膜菌株有效，無(wú)莢膜菌株（如非分型株）可能不顯色，不可僅憑莢膜有無(wú)排除診斷。
2、衛(wèi)星現(xiàn)象試驗(yàn)的規(guī)范操作
衛(wèi)星現(xiàn)象是流感嗜血桿菌的特征性試驗(yàn)，但需注意：
需使用
金黃色葡萄球菌 作為 V 因子提供者（其產(chǎn)生的 V 因子可擴(kuò)散至培養(yǎng)基中），其他細(xì)菌可能不產(chǎn)生足夠 V 因子，導(dǎo)致試驗(yàn)假陰性。
接種時(shí)需將待檢菌與金黃色葡萄球菌劃線(xiàn)距離適當(dāng)（約 5~10mm），過(guò)近可能因葡萄球菌過(guò)度生長(zhǎng)抑制待檢菌，過(guò)遠(yuǎn)則 V 因子擴(kuò)散不足，影響結(jié)果。
需在血平板上進(jìn)行（巧克力平板中已含 V 因子，可能干擾試驗(yàn)）。
3、生化反應(yīng)的選擇與判斷
基礎(chǔ)生化反應(yīng)包括：發(fā)酵葡萄糖（產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）、不發(fā)酵乳糖、氧化酶陽(yáng)性、觸酶陽(yáng)性（部分菌株），這些是與其他革蘭氏陰性桿菌（如副流感嗜血桿菌、
卡他莫拉菌）鑒別的關(guān)鍵。
注意：少數(shù)菌株可能生化反應(yīng)不典型（如遲緩發(fā)酵葡萄糖），需結(jié)合其他試驗(yàn)（如衛(wèi)星現(xiàn)象、因子需求試驗(yàn)）確認(rèn)。
4、血清型鑒定的局限性
僅對(duì)有莢膜菌株（a~f 型）有效，非分型株（無(wú)莢膜）無(wú)法通過(guò)血清型鑒定，需結(jié)合分子生物學(xué)方法（如 PCR 檢測(cè)莢膜基因）區(qū)分。
乳膠凝集試驗(yàn)檢測(cè) Hib 莢膜抗原時(shí)，需注意標(biāo)本中可能存在的交叉反應(yīng)物質(zhì)（如其他細(xì)菌的多糖抗原），必要時(shí)用陰性對(duì)照驗(yàn)證。
5、耐藥菌株的影響
若標(biāo)本來(lái)自已使用抗生素的患者，細(xì)菌可能因受抑制而生長(zhǎng)不良，導(dǎo)致培養(yǎng)或鑒定困難，需結(jié)合抗原檢測(cè)或分子生物學(xué)方法（如 PCR）輔助診斷。
鑒定時(shí)需同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，尤其注意產(chǎn) β- 內(nèi)酰胺酶菌株（對(duì)氨芐西林耐藥），避免因表型改變影響鑒定結(jié)果。
三、其他通用注意事項(xiàng)
污染控制：操作需在無(wú)菌環(huán)境中進(jìn)行，避免雜菌污染（尤其是
葡萄球菌、
奈瑟菌等，可能與流感嗜血桿菌形態(tài)或培養(yǎng)特性相似）。
質(zhì)量控制：每次試驗(yàn)需同時(shí)接種標(biāo)準(zhǔn)菌株（如
流感嗜血桿菌 ATCC 10211）作為陽(yáng)性對(duì)照，確保培養(yǎng)基、試劑有效。
通過(guò)嚴(yán)格把控上述環(huán)節(jié)，可提高
流感嗜血桿菌培養(yǎng)和鑒定的準(zhǔn)確性，為臨床診斷和治療提供可靠依據(jù)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢(xún)網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買(mǎi)等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢(xún)類(lèi)網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶(hù)來(lái)詢(xún)！
下載附件
上一篇：酒酒球菌的乳酸發(fā)酵工藝的具體操作步驟是怎樣的？
下一篇：驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中常用微生物的種類(lèi)與特性及應(yīng)用場(chǎng)景與選擇原則！