李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基的原理與使用方法及注意事項！
小楊 / 2025-09-12 09:09:06
李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基是微生物檢測中用于選擇性增菌培養(yǎng)李斯特菌屬（Listeria） 的常用培養(yǎng)基，尤其適用于食品、環(huán)境樣本等復(fù)雜基質(zhì)中低含量李斯特菌的富集，為后續(xù)分離、鑒定奠定基礎(chǔ)。以下從原理、使用方法、注意事項三方面詳細說明：
一、培養(yǎng)基原理
李斯特菌屬（如
單核細胞增生李斯特菌，致病性最強）在自然環(huán)境中分布廣泛，但在樣本中常因含量低、受雜菌（如
大腸菌群、
葡萄球菌）抑制而難以直接分離。該培養(yǎng)基通過營養(yǎng)供給 + 選擇性抑制的雙重設(shè)計，實現(xiàn)李斯特菌的高效增殖，核心原理如下：
1、營養(yǎng)成分：滿足李斯特菌生長需求
基礎(chǔ)培養(yǎng)基的核心成分以“提供全面營養(yǎng)”為目標，確保李斯特菌在增菌過程中快速繁殖，常見成分及作用如下：
主要成分 作用
胰酪蛋白胨 提供優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)水解產(chǎn)物（氨基酸、多肽），作為碳源、氮源和能量來源
酵母浸粉 補充 B 族維生素、生長因子，促進李斯特菌（需特殊生長因子）的生長
葡萄糖 提供速效碳源，滿足李斯特菌的基礎(chǔ)能量需求
磷酸二氫鉀/鈉 維持培養(yǎng)基 pH 穩(wěn)定（通常為 7.0±0.2），避免 pH 波動影響細菌生長
氯化鈉 調(diào)節(jié)滲透壓，模擬李斯特菌自然生長環(huán)境（如土壤、食品基質(zhì)）
2、選擇性成分：抑制雜菌，保留李斯特菌
萘啶酮酸（Nalidixic Acid）：屬于喹諾酮類抗菌劑，通過抑制細菌 DNA 旋轉(zhuǎn)酶，阻斷 DNA 復(fù)制，對革蘭氏陰性菌（如
大腸埃希菌、
沙門氏菌） 有強效抑制作用，但對革蘭氏陽性的李斯特菌影響極小。
吖啶黃（Acridine Yellow）：屬于堿性染料，通過干擾細菌核酸合成，對部分革蘭氏陽性雜菌（如
葡萄球菌、
鏈球菌） 有抑制作用，同時不影響李斯特菌生長。
通過添加上述兩種添加劑，培養(yǎng)基可有效排除樣本中 90% 以上的雜菌，使
李斯特菌在競爭中占據(jù)優(yōu)勢，實現(xiàn)數(shù)量級的增殖（通常增菌 18-24 小時后，李斯特菌濃度可提升 10³-10?倍）。
二、使用方法
1、試劑與器材準備
基礎(chǔ)培養(yǎng)基：李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)干粉（按說明書規(guī)格，如 22.0g/1000mL）；
選擇性添加劑：萘啶酮酸溶液（通常 10mg/mL，過濾除菌）、吖啶黃溶液（通常 10mg/mL，過濾除菌）；
器材：錐形瓶、移液管、高壓滅菌鍋、無菌操作臺、培養(yǎng)箱（30-37℃）、pH 計（或 pH 試紙）。
2、培養(yǎng)基制備步驟
溶解干粉：按培養(yǎng)基說明書比例，稱取定量基礎(chǔ)干粉，加入 1000mL 純化水（或蒸餾水），置于錐形瓶中，攪拌至完全溶解（可輕微加熱助溶，避免煮沸）。
調(diào)節(jié) pH：用 pH 計檢測溶液 pH，若偏離 7.0±0.2，用 1mol/L HCl 或 NaOH 緩慢調(diào)節(jié)至目標范圍。
分裝滅菌：將調(diào)節(jié)好的培養(yǎng)基分裝至錐形瓶（每瓶 100mL 或 200mL，根據(jù)樣本量確定），加塞后用牛皮紙包裹瓶口，置于高壓滅菌鍋，121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²）滅菌 15 分鐘。
添加選擇性添加劑：滅菌后取出培養(yǎng)基，置于無菌操作臺內(nèi)冷卻至 45-50℃（手觸錐形瓶外壁不燙手），按比例加入無菌的萘啶酮酸溶液和吖啶黃溶液（通常每 100mL 培養(yǎng)基各加 0.5mL，最終濃度均為 50μg/mL，具體按添加劑說明書調(diào)整），輕輕搖勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3、樣本接種與增菌培養(yǎng)
樣本處理：根據(jù)樣本類型（如食品、環(huán)境拭子）按標準方法處理（如食品樣本需均質(zhì)、稀釋，拭子樣本需用無菌生理鹽水洗脫），制備成 1:10 的樣本勻液。
接種：在無菌操作下，取 10mL 樣本勻液（或處理后的樣本），接種至 100mL 已添加選擇性添加劑的李氏菌增菌肉湯中，輕輕混勻。
培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)基置于30-37℃恒溫培養(yǎng)箱，靜置培養(yǎng)18-24 小時（若樣本中李斯特菌含量極低，可延長至 48 小時，但需注意避免雜菌過度生長）。
后續(xù)操作：增菌完成后，取適量菌液劃線接種至李斯特菌選擇性分離培養(yǎng)基，進行后續(xù)分離、鑒定（如生化試驗、血清學(xué)試驗）。
三、關(guān)鍵注意事項
選擇性添加劑的時效性：萘啶酮酸和吖啶黃溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，或分裝后避光冷藏（4℃）保存，且保存時間不超過 1 周；添加時需確保培養(yǎng)基溫度降至 45-50℃，避免高溫破壞添加劑活性。
滅菌控制：基礎(chǔ)培養(yǎng)基需嚴格按 121℃、15 分鐘滅菌，避免滅菌不徹底導(dǎo)致雜菌污染，或滅菌過度破壞營養(yǎng)成分。
培養(yǎng)溫度控制：李斯特菌為兼性厭氧菌，最適生長溫度為 30-37℃，需嚴格控制培養(yǎng)箱溫度，避免溫度過高（>37℃）抑制李斯特菌生長，或過低（<30℃）延長培養(yǎng)時間。
樣本污染處理：若增菌后培養(yǎng)基出現(xiàn)異常渾濁、異味或顏色變化，可能是樣本雜菌過多或操作污染，需重新處理樣本并重復(fù)增菌步驟。
通過上述原理設(shè)計和標準化操作，
李氏菌增菌肉湯基礎(chǔ)培養(yǎng)基可高效富集李斯特菌，為后續(xù)檢測提供高濃度的目標菌液，是食品微生物安全檢測（如 GB 4789.30《食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 李斯特菌屬檢驗》）中的核心培養(yǎng)基之一。
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