志賀菌屬微生物學檢查的核心依據(jù)與關鍵步驟及操作流程！
小楊 / 2025-09-23 09:34:54
志賀菌屬的微生物學檢查核心是分離培養(yǎng)與鑒定，結合血清學試驗和分子生物學方法，最終實現(xiàn)精準檢測，為細菌性痢疾的診斷和治療提供依據(jù)。
該檢查流程通常分為標本采集、直接檢查、分離培養(yǎng)、鑒定試驗、毒力檢測及分子生物學檢測六個關鍵步驟，各環(huán)節(jié)均有嚴格要求以確保結果準確。
一、標本采集
標本質量直接影響檢測結果，需嚴格遵循“早期、新鮮、正確部位”原則。
采集時間：發(fā)病早期（最好在服用抗生素前），此時糞便中細菌數(shù)量最多，檢出率最高。
采集部位：優(yōu)先選取黏液膿血便，避免采集成形糞便（含菌量極少）。若患者無糞便，可通過直腸拭子采集。
標本處理：采集后需立即送檢，若無法及時送檢（超過 2 小時），需將標本放入運送培養(yǎng)基中保存，防止細菌死亡。
二、直接檢查
該步驟為初步篩查，快速判斷是否存在可疑菌，但不能確診。
生理鹽水涂片鏡檢：取少量黏液膿血便涂片，革蘭染色后鏡檢。志賀菌屬為革蘭陰性短小桿菌，無芽孢、無莢膜，多數(shù)無鞭毛（與沙門菌的重要區(qū)別）。鏡檢若發(fā)現(xiàn)大量此類細菌，結合臨床癥狀，可初步懷疑。
抗原檢測：采用免疫熒光法、酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）等方法，直接檢測標本中的志賀菌抗原。優(yōu)點是快速（1-2 小時出結果），適合早期診斷或大規(guī)模流行病學篩查，但特異性略低于培養(yǎng)法，可能出現(xiàn)假陽性。
三、分離培養(yǎng)
分離培養(yǎng)是確診志賀菌感染的金標準之一，可獲得純菌株用于后續(xù)鑒定。
培養(yǎng)基選擇：
先接種于腸道選擇培養(yǎng)基，如 SS 瓊脂（沙門菌 - 志賀菌瓊脂）、麥康凱瓊脂或中國藍瓊脂，抑制雜菌生長，選擇性培養(yǎng)腸道致病菌。
志賀菌在 SS 瓊脂上生長后，形成無色、半透明、光滑、較小的菌落（直徑 1-2mm），因不發(fā)酵乳糖，故菌落周圍無紅色環(huán)（乳糖發(fā)酵菌如大腸桿菌會形成紅色菌落）。
培養(yǎng)條件：37℃需氧培養(yǎng) 18-24 小時，若培養(yǎng) 48 小時仍無菌落生長，可報告“未檢出志賀菌屬”。
純培養(yǎng)：挑取可疑菌落，接種于營養(yǎng)瓊脂或雙糖鐵培養(yǎng)基（TSI） ，獲得純菌株并進行初步生化反應判斷。
四、鑒定試驗
通過生化反應和血清學試驗，明確是否為志賀菌屬及具體血清型。
（1）生化反應鑒定
志賀菌屬的生化反應具有典型特征，可與其他腸道桿菌區(qū)分，常用雙糖鐵培養(yǎng)基和生化反應管檢測：
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（2）血清學鑒定
群血清凝集試驗：先用四種群特異性抗血清（抗 A、抗 B、抗 C、抗 D）與純菌株進行玻片凝集試驗，確定菌株所屬群。
若與抗 A 血清凝集，為痢疾志賀菌（A 群）；
與抗 B 血清凝集，為福氏志賀菌（B 群）（我國最常見的血清群）；
與抗 C 血清凝集，為鮑氏志賀菌（C 群）；
與抗 D 血清凝集，為宋內志賀菌（D 群）。
型血清凝集試驗：確定群后，再用該群的分型血清（如福氏志賀菌分為 1-6 型）進一步鑒定至具體血清型，用于流行病學調查和溯源。
五、毒力檢測
志賀菌的致病性主要依賴其毒力因子（如侵襲力、內毒素、外毒素），毒力檢測可輔助判斷菌株的致病能力。
侵襲力檢測：常用HeLa 細胞或 Vero 細胞侵襲試驗，觀察細菌是否能侵入細胞內生長繁殖。志賀菌具有侵襲腸黏膜上皮細胞的能力，試驗陽性提示菌株有致病性。
毒素檢測：
內毒素：可通過鱟試驗檢測，但所有革蘭陰性菌均有內毒素，特異性較低；
外毒素（志賀毒素）：僅痢疾志賀菌 1 型和部分 2 型產生，可通過 ELISA 檢測，陽性提示菌株毒力更強，易引起嚴重癥狀。
六、分子生物學檢測
現(xiàn)代實驗室常用分子生物學方法，快速、敏感地檢測志賀菌，尤其適合抗生素治療后細菌培養(yǎng)陰性的情況。
聚合酶鏈反應（PCR）：檢測志賀菌屬特有的基因（如侵襲質?？乖?ipaH），特異性和敏感性均高于傳統(tǒng)培養(yǎng)法，可在數(shù)小時內出結果，還能區(qū)分不同血清群。
實時熒光定量 PCR（qPCR）：不僅能定性檢測，還能定量分析標本中志賀菌的數(shù)量，用于評估感染嚴重程度和治療效果。
基因測序：通過全基因組測序，分析菌株的基因結構、進化關系和耐藥基因，為流行病學調查和精準用藥提供依據(jù)。
七、耐藥性檢測
志賀菌對常用抗生素（如磺胺類、四環(huán)素類、氟喹諾酮類）的耐藥率逐年上升，耐藥性檢測至關重要。
紙片擴散法（K-B 法）：將含有不同抗生素的紙片貼在接種了志賀菌的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后測量抑菌圈直徑，判斷菌株對該抗生素的敏感性。
肉湯稀釋法：測定最低抑菌濃度（MIC），更精準地判斷耐藥程度，是耐藥性檢測的金標準。
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