洋蔥伯克霍爾氏菌鑒定培養(yǎng)基的檢驗(yàn)原理和詳細(xì)使用方法！
小楊 / 2025-09-24 09:05:29
洋蔥伯克霍爾氏菌鑒定培養(yǎng)基的核心檢驗(yàn)原理是利用該菌獨(dú)特的生化特性（如對(duì)特定碳源的利用能力、無熒光產(chǎn)生等）與其他細(xì)菌形成差異，從而實(shí)現(xiàn)分離和鑒定；使用方法需嚴(yán)格遵循“培養(yǎng)基制備→接種→培養(yǎng)→觀察結(jié)果”的流程，確保結(jié)果準(zhǔn)確。
一、核心檢驗(yàn)原理
洋蔥伯克霍爾氏菌（Burkholderia cepacia，簡稱 Bcc）的鑒定培養(yǎng)基，其原理主要基于 3 個(gè)關(guān)鍵特性設(shè)計(jì)，通過“選擇性抑制 + 生化鑒別”雙重作用實(shí)現(xiàn)鑒定：
選擇性抑制雜菌培養(yǎng)基中添加了頭孢他啶和多粘菌素 B等抗生素，能有效抑制大多數(shù)革蘭氏陽性菌、其他常見革蘭氏陰性菌（如
大腸埃希菌、
銅綠假單胞菌）的生長，僅允許 Bcc 等少數(shù)耐藥菌存活，減少雜菌干擾。
碳源利用差異鑒別培養(yǎng)基以蔗糖為主要碳源，Bcc 能高效分解蔗糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)基中的 pH 指示劑（如溴甲酚紫）顏色由紫色變?yōu)辄S色；而其他可能存活的雜菌（如
洋蔥假單胞菌）通常無法分解蔗糖，菌落周圍仍保持紫色。
熒光排除法輔助部分與 Bcc 形態(tài)相似的細(xì)菌（如
銅綠假單胞菌）在紫外燈（365nm）下會(huì)產(chǎn)生綠色熒光，而 Bcc 無熒光特性。培養(yǎng)后結(jié)合紫外燈觀察，可進(jìn)一步排除干擾菌，提高鑒定準(zhǔn)確性。
二、詳細(xì)使用方法
使用流程需嚴(yán)格控制無菌操作和培養(yǎng)條件，避免污染或結(jié)果誤判，具體步驟如下：
1、培養(yǎng)基制備（以干粉培養(yǎng)基為例）
稱量與溶解：按培養(yǎng)基說明書比例（如 BCSA 培養(yǎng)基通常為 40g/L），稱取干粉于純化水中，攪拌至完全溶解（可輕微加熱助溶，但避免過度煮沸）。
滅菌：將溶解后的培養(yǎng)基分裝至錐形瓶或培養(yǎng)皿（未倒板時(shí)），置于121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘，滅菌后取出冷卻至 45-50℃（手觸瓶壁不燙手為宜）。
倒板：在無菌操作臺(tái)內(nèi)，將冷卻后的培養(yǎng)基均勻倒入無菌培養(yǎng)皿（每皿約 15-20mL），待其自然凝固（約 30 分鐘，避免震動(dòng)），凝固后標(biāo)記名稱和日期，備用（可 4℃冷藏保存，有效期不超過 1 周）。
2、樣品接種
無菌操作準(zhǔn)備：接種前消毒操作臺(tái)，點(diǎn)燃酒精燈，準(zhǔn)備好接種環(huán)、樣品（如臨床標(biāo)本、環(huán)境水樣）。
接種方式：
若為液體樣品（如水樣）：取 0.1-0.2mL 樣品，用無菌涂布棒均勻涂布在培養(yǎng)基表面。
若為固體樣品（如土壤、食品）：先將樣品制成勻漿（用無菌生理鹽水稀釋），再取上清液涂布。
若為純菌分離：用接種環(huán)取少量菌液，在培養(yǎng)基表面進(jìn)行“劃線分離”（確保單菌落生長，便于觀察形態(tài)）。
3、培養(yǎng)條件控制
將接種后的培養(yǎng)皿倒置（避免冷凝水滴落污染菌落），放入35-37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48-72 小時(shí)（Bcc 生長速度較慢，需足夠時(shí)間形成典型菌落，避免提前觀察導(dǎo)致漏判）。
4、結(jié)果觀察與判斷
培養(yǎng)結(jié)束后，結(jié)合“菌落形態(tài) + 顏色變化 + 熒光特性”綜合判斷，典型陽性結(jié)果如下：
觀察項(xiàng)目 洋蔥伯克霍爾氏菌陽性特征 陰性/雜菌特征
菌落形態(tài) 圓形、邊緣整齊、表面光滑濕潤、直徑 1-2mm 形態(tài)不規(guī)則、邊緣粗糙或黏液狀
培養(yǎng)基顏色 菌落周圍培養(yǎng)基由紫變黃色 無顏色變化，仍為紫色
紫外燈（365nm） 無熒光 可能產(chǎn)生綠色或其他顏色熒光（如
銅綠假單胞菌）
結(jié)果判定：同時(shí)滿足“菌落形態(tài)典型 + 培養(yǎng)基變黃 + 無熒光”，可初步判定為 Bcc 陽性；若不符合任一特征，則為陰性，需進(jìn)一步用生化鑒定管或分子生物學(xué)方法確認(rèn)。
三、注意事項(xiàng)
無菌操作關(guān)鍵：全程需在無菌環(huán)境下進(jìn)行（如無菌操作臺(tái)），接種環(huán)、涂布棒需灼燒滅菌（冷卻后再使用，避免燙死細(xì)菌），防止環(huán)境雜菌污染。
抗生素穩(wěn)定性：部分培養(yǎng)基中的抗生素對(duì)高溫敏感，若為“滅菌后添加”型培養(yǎng)基，需待培養(yǎng)基滅菌后冷卻至 45-50℃再加入抗生素，混勻后倒板，避免高溫破壞抗生素活性。
培養(yǎng)時(shí)間不可縮短：Bcc 生長速度慢于常見菌（如
大腸埃希菌），若培養(yǎng)時(shí)間不足 24 小時(shí)，可能僅形成微小菌落，無法觀察到顏色變化，導(dǎo)致假陰性。
結(jié)果復(fù)核：初步鑒定陽性后，建議通過生化反應(yīng)管（如氧化酶試驗(yàn)陽性、賴氨酸脫羧酶陰性）或質(zhì)譜鑒定儀進(jìn)一步確認(rèn)，避免因相似菌導(dǎo)致誤判。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有對(duì)菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質(zhì)服務(wù)，對(duì)購買項(xiàng)目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項(xiàng)目準(zhǔn)確到位，都有相關(guān)人士進(jìn)行維護(hù),確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質(zhì)服務(wù)！也正因?yàn)榇?，北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關(guān)系！
下載附件
上一篇：志賀菌屬微生物學(xué)檢查的核心依據(jù)與關(guān)鍵步驟及操作流程！
下一篇：大鼠臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定標(biāo)準(zhǔn)與體外培養(yǎng)及應(yīng)用領(lǐng)域！