大鼠臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Rat Umbilical Vein Endothelial Cells，簡稱RUVECs）是從大鼠胚胎臍帶靜脈內(nèi)壁分離得到的血管內(nèi)皮細(xì)胞，因具有血管內(nèi)皮細(xì)胞的典型功能和易獲取、易培養(yǎng)的特點，成為心血管研究、炎癥機制、藥物篩選等領(lǐng)域的常用體外實驗?zāi)Ｐ汀?/div>
一、RUVECs 的基本特性與鑒定標(biāo)準(zhǔn)
作為血管內(nèi)皮細(xì)胞的“代表”，RUVECs 具備內(nèi)皮細(xì)胞的核心生物學(xué)特征，實驗中需通過特定指標(biāo)鑒定其純度和活性，避免雜細(xì)胞污染（如成纖維細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞）。
1、核心生物學(xué)特性
形態(tài)特征：體外培養(yǎng)時呈典型的“鋪路石樣”貼壁生長，細(xì)胞呈多邊形或短梭形，邊界清晰，單層排列緊密，無重疊生長（除非密度過高）。
功能特征：
合成與分泌功能：能產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、一氧化氮（NO）、前列環(huán)素（PGI?）等，參與血管舒張、抗凝和血管新生調(diào)控。
屏障功能：單層細(xì)胞可形成緊密連接，模擬血管內(nèi)皮屏障，常用于研究炎癥因子對屏障完整性的破壞。
凝血調(diào)節(jié)功能：表達(dá)凝血相關(guān)分子（如血栓調(diào)節(jié)蛋白、組織因子），可激活或抑制凝血 cascade，用于抗凝血藥物機制研究。
2、關(guān)鍵鑒定指標(biāo)（實驗中必做）
為確保細(xì)胞為純內(nèi)皮細(xì)胞，需通過免疫熒光、Western Blot 或流式細(xì)胞術(shù)檢測以下特異性標(biāo)志物：
鑒定指標(biāo)（標(biāo)志物） 作用與意義 陽性結(jié)果判斷
CD31（血小板內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子） 內(nèi)皮細(xì)胞特異性表面蛋白，參與細(xì)胞間黏附 免疫熒光顯示細(xì)胞膜呈綠色，陽性率需≥95%
vWF（血管性血友病因子） 內(nèi)皮細(xì)胞特有的胞質(zhì)顆粒蛋白，參與凝血 免疫熒光顯示胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)紅色顆粒狀熒光，證明細(xì)胞具備分泌功能
Factor Ⅷ（凝血因子 Ⅷ） 內(nèi)皮細(xì)胞合成的凝血相關(guān)蛋白，特異性高于成纖維細(xì)胞 Western Blot 檢測到對應(yīng)分子量（約 200kDa）的蛋白條帶
血管內(nèi)皮鈣黏蛋白 內(nèi)皮細(xì)胞間緊密連接的關(guān)鍵蛋白，維持屏障功能 免疫熒光顯示細(xì)胞邊界呈連續(xù)熒光帶，證明細(xì)胞間連接正常
RUVECs 的培養(yǎng)條件需模擬體內(nèi)血管內(nèi)皮微環(huán)境，否則易出現(xiàn)細(xì)胞分化、功能丟失或污染，以下是關(guān)鍵操作要點和常見問題解決方案。
1、核心培養(yǎng)條件
培養(yǎng)基選擇：需使用內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基，常用配方為“DMEM/F12 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 + 10%-15% 胎牛血清（FBS） + 內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（ECGF，10-20ng/mL） + 肝素（50-100U/mL）”。
（注：肝素可抑制平滑肌細(xì)胞污染，ECGF 促進內(nèi)皮細(xì)胞增殖，避免用普通 MEM 培養(yǎng)基，會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢。）
培養(yǎng)環(huán)境：37℃、5% CO?恒溫培養(yǎng)箱，濕度保持在 95% 以上，避免 CO?濃度波動導(dǎo)致培養(yǎng)基 pH 值變化（內(nèi)皮細(xì)胞對 pH 敏感，最佳 pH 7.2-7.4）。
傳代操作：
當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá) 80%-90% 時傳代（避免過密導(dǎo)致細(xì)胞老化）；
用 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 消化 1-2 分鐘（鏡下觀察到細(xì)胞收縮、間隙增大即可終止）；
傳代比例為 1:2-1:3（比例過高易導(dǎo)致細(xì)胞生長停滯），一般可傳 5-8 代（超過 10 代后細(xì)胞功能會逐漸丟失）。
2、常見培養(yǎng)問題與解決方案
常見問題 可能原因 解決方案
細(xì)胞生長緩慢，形態(tài)變梭形 1.血清質(zhì)量差；2.缺乏 ECGF 或肝素；3.細(xì)胞代次過高 1.更換合格的胎牛血清；2.補充 ECGF 和肝素至推薦濃度；3.更換低代次細(xì)胞
細(xì)胞出現(xiàn)“拉絲狀”雜細(xì)胞 成纖維細(xì)胞污染 1.傳代時用“差速貼壁法”：消化后將細(xì)胞懸液接種到新培養(yǎng)皿，靜置 20 分鐘，成纖維細(xì)胞先貼壁，收集上清液接種到另一培養(yǎng)皿；2.若污染嚴(yán)重，需重新分離細(xì)胞
細(xì)胞單層出現(xiàn)“漏洞” 1.消化時間過長；2.培養(yǎng)基 pH 值異常；3.污染 1.縮短胰酶消化時間，鏡下密切觀察；2.檢查培養(yǎng)箱 CO?濃度，更換新鮮培養(yǎng)基；3.若有污染，丟棄細(xì)胞
三、RUVECs 的主要研究應(yīng)用領(lǐng)域
因能模擬體內(nèi)血管內(nèi)皮的生理和病理狀態(tài)，RUVECs 被廣泛用于以下研究方向：
1、心血管疾病機制研究
動脈粥樣硬化：通過給細(xì)胞添加氧化低密度脂蛋白，模擬動脈粥樣硬化早期內(nèi)皮細(xì)胞損傷，研究炎癥因子的表達(dá)變化，或篩選能保護內(nèi)皮細(xì)胞的藥物。
高血壓相關(guān)研究：檢測不同血壓模型大鼠的 RUVECs 中 NO 合成酶（eNOS）的活性（NO 是重要的血管舒張因子，高血壓時 eNOS 活性下降），研究藥物對 eNOS 的調(diào)控作用。
2、炎癥與免疫反應(yīng)研究
內(nèi)皮細(xì)胞黏附實驗：炎癥狀態(tài)下，RUVECs 會表達(dá)黏附分子，通過檢測白細(xì)胞（如中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞）與 RUVECs 的黏附率，研究炎癥抑制劑（如糖皮質(zhì)激素）的作用效果。
血管通透性研究：用熒光素鈉或 FITC - 白蛋白檢測 RUVECs 單層的通透性，模擬炎癥或感染時血管屏障的破壞，研究膿毒癥等疾病中內(nèi)皮屏障功能的變化。
3、藥物篩選與毒性評價
血管新生藥物篩選：通過“管腔形成實驗”，觀察藥物處理后 RUVECs 形成管腔的數(shù)量和長度，篩選促進血管新生的藥物或抑制血管新生的藥物。
藥物內(nèi)皮毒性評價：檢測藥物對 RUVECs 活性、凋亡率（用流式細(xì)胞術(shù)檢測 Annexin V/PI）和屏障功能的影響，評估藥物是否存在血管內(nèi)皮毒性。
4、血栓形成機制與抗凝研究
研究抗凝藥物對 RUVECs 分泌 vWF 和凝血因子 Ⅷ 的影響，或通過“凝血酶誘導(dǎo)血小板黏附實驗”，觀察藥物對內(nèi)皮細(xì)胞表面凝血功能的調(diào)控作用。
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