微生物細(xì)胞大小測定的具體實驗步驟及其操作全流程！
小楊 / 2025-10-09 09:21:03
百歐博偉生物：微生物細(xì)胞大小測定的核心實驗方法是顯微測微尺法，以下是具體且可落地的操作步驟，涵蓋從準(zhǔn)備到數(shù)據(jù)處理的全流程。
一、實驗前準(zhǔn)備
1、材料與儀器
微生物樣品：需提前培養(yǎng)至對數(shù)生長期（如
大腸桿菌培養(yǎng)液、
酵母菌懸液），若樣品濃度過高，需用無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，避免細(xì)胞重疊。
儀器：光學(xué)顯微鏡（需配備高倍鏡和油鏡）、目鏡測微尺、鏡臺測微尺、載玻片、蓋玻片、無菌滴管、擦鏡紙、香柏油。
試劑：無菌生理鹽水（用于稀釋樣品）、二甲苯（用于清潔油鏡鏡頭）。
2、工具檢查與安裝
檢查目鏡測微尺和鏡臺測微尺是否完好，無劃痕或刻度模糊。
取下顯微鏡目鏡，將目鏡測微尺的刻度面朝下（確保觀察時能清晰看到刻度），放入目鏡的視場光闌處，再重新裝回目鏡。
將鏡臺測微尺的刻度面朝上，放在顯微鏡載物臺中央，用壓片夾固定。
二、核心步驟：鏡臺測微尺校準(zhǔn)目鏡測微尺
校準(zhǔn)的目的是確定不同放大倍數(shù)下，目鏡測微尺每一小格對應(yīng)的實際長度（μm），這是后續(xù)測量細(xì)胞大小的關(guān)鍵前提。
1、低倍鏡（10× 物鏡）校準(zhǔn)
打開顯微鏡光源，調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋和細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使鏡臺測微尺的刻度清晰成像。
移動載物臺，使鏡臺測微尺的某一刻度線與目鏡測微尺的某一刻度線完全重合（作為起始點）。
沿刻度方向觀察，找到兩組刻度線再次完全重合的位置（作為終點），分別記錄：
目鏡測微尺重合區(qū)間的格數(shù)（記為 A）
鏡臺測微尺重合區(qū)間的格數(shù)（記為 B）
計算低倍鏡下目鏡測微尺每小格實際長度：
目鏡每小格長度（μm）=（B×10μm）÷A
（注：鏡臺測微尺每小格固定為 10μm，總長 1mm=100 小格）
2、高倍鏡（40× 物鏡）與油鏡（100× 物鏡）校準(zhǔn)
高倍鏡校準(zhǔn)：將物鏡切換至 40×，重復(fù)低倍鏡校準(zhǔn)的步驟 2-4，計算高倍鏡下目鏡測微尺每小格的實際長度。
（注意：切換物鏡后需重新調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，確保刻度清晰，不可調(diào)節(jié)粗準(zhǔn)焦螺旋，避免壓壞鏡頭和測微尺）
油鏡校準(zhǔn)：在鏡臺測微尺刻度面中央滴一滴香柏油，切換至 100× 油鏡，同樣重復(fù)步驟 2-4，計算油鏡下的刻度換算值。
（油鏡觀察后，需立即用擦鏡紙蘸少量二甲苯擦拭鏡頭，再用干凈擦鏡紙擦凈殘留二甲苯）
三、微生物細(xì)胞大小測量
1、樣品制備
取干凈載玻片，用無菌滴管吸取少量稀釋后的微生物樣品，滴在載玻片中央（約 1-2 滴，避免過多溢出）。
用鑷子夾取蓋玻片，從樣品一側(cè)緩慢蓋上（避免產(chǎn)生氣泡，氣泡會影響觀察和測量），制成壓片。
2、細(xì)胞觀察與測量
將樣品壓片放在載物臺中央，先通過低倍鏡找到清晰的細(xì)胞，再切換至高倍鏡或油鏡（細(xì)菌需用油鏡，酵母菌用高倍鏡即可）。
選取視野中形態(tài)完整、無重疊的細(xì)胞（至少 10-20 個，保證數(shù)據(jù)代表性），分別測量：
球菌：測量其直徑（目鏡測微尺覆蓋的格數(shù)）
桿菌：測量其長度和寬度（分別記錄對應(yīng)的格數(shù)）
記錄每個細(xì)胞對應(yīng)的目鏡測微尺格數(shù)，結(jié)合校準(zhǔn)好的“目鏡每小格實際長度”，計算細(xì)胞的實際大?。?/div>
細(xì)胞實際大?。?mu;m）= 目鏡測微尺格數(shù) × 目鏡每小格實際長度
3、數(shù)據(jù)處理
統(tǒng)計所有測量細(xì)胞的大小數(shù)據(jù)，計算平均值（如桿菌的平均長度、平均寬度）。
記錄不同放大倍數(shù)下的校準(zhǔn)值和測量結(jié)果，整理成實驗表格，確保數(shù)據(jù)可追溯。
四、實驗后整理與注意事項
1、儀器清潔與整理
取下鏡臺測微尺，用清水沖洗干凈后晾干；目鏡測微尺可留在目鏡中，或取出后放入專用盒保存。
清潔顯微鏡：用擦鏡紙擦拭物鏡和目鏡，載物臺用濕紗布擦凈，關(guān)閉光源，將顯微鏡歸位。
2、關(guān)鍵注意事項
校準(zhǔn)必須針對每個物鏡單獨進(jìn)行，不同放大倍數(shù)的校準(zhǔn)值不可通用。
測量細(xì)胞時，若視野中細(xì)胞重疊或變形，需更換視野重新選取，避免數(shù)據(jù)誤差。
油鏡使用時，香柏油需滴在鏡臺測微尺或樣品的正中央，且觀察后必須立即清潔，防止鏡頭被腐蝕。
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