腸球菌顯色培養(yǎng)基的核心原理與標(biāo)準(zhǔn)使用方法及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-10-16 08:58:13
腸球菌顯色培養(yǎng)基通過特定酶底物反應(yīng)實(shí)現(xiàn)腸球菌的選擇性分離與鑒別，能讓目標(biāo)菌落呈現(xiàn)特征顏色，快速與其他細(xì)菌區(qū)分。
一、核心原理
其原理主要基于“選擇性抑制”和“特異性顯色”兩大核心，具體分為兩步：
1、選擇性抑制雜菌
培養(yǎng)基中添加了疊氮鈉或膽汁鹽等抑制劑。
這些成分能抑制革蘭氏陰性菌、真菌以及部分非目標(biāo)革蘭氏陽性菌（如
葡萄球菌）的生長。
腸球菌對這類抑制劑有較強(qiáng)耐受性，可在培養(yǎng)基上正常繁殖，從而實(shí)現(xiàn)“篩選”效果。
2、特異性顯色鑒別
培養(yǎng)基含針對腸球菌特定酶的顯色底物。
腸球菌能產(chǎn)生 β- 葡萄糖苷酶，該酶會分解培養(yǎng)基中的顯色底物，釋放出有色物質(zhì)（通常為藍(lán)色或紫色）。
最終腸球菌菌落呈現(xiàn)藍(lán)色/紫色，其他未被抑制的雜菌則為無色或其他顏色，實(shí)現(xiàn)“鑒別”效果。
二、標(biāo)準(zhǔn)使用方法
使用需遵循“準(zhǔn)備 - 接種 - 培養(yǎng) - 觀察”的流程，關(guān)鍵步驟如下：
1、培養(yǎng)基制備
取商品化的腸球菌顯色培養(yǎng)基干粉，按說明書比例（通常為 20-30g/L）加入蒸餾水或純化水。
加熱煮沸并持續(xù)攪拌，確保干粉完全溶解，避免結(jié)塊。
若需滅菌，121℃高壓蒸汽滅菌 15 分鐘（具體以說明書為準(zhǔn)），滅菌后冷卻至 45-50℃?zhèn)溆谩?/div>
2、樣品接種
取待檢測樣品（如食品勻漿、臨床標(biāo)本、環(huán)境水樣），采用涂布法或劃線法接種于冷卻后的培養(yǎng)基表面。
涂布法需用無菌 L 型玻棒將樣品均勻涂開，確保菌落分散；劃線法可通過分區(qū)劃線獲得單菌落。
3、培養(yǎng)條件
將接種好的培養(yǎng)基放入 35-37℃恒溫培養(yǎng)箱，需有氧環(huán)境（無需厭氧），培養(yǎng) 18-24 小時(shí)。
若部分腸球菌生長較慢，可延長培養(yǎng)至 48 小時(shí)，但需注意避免雜菌過度繁殖。
4、結(jié)果判讀
陽性結(jié)果：培養(yǎng)基上出現(xiàn)藍(lán)色或紫色菌落，菌落形態(tài)通常為圓形、邊緣整齊、表面光滑，即為疑似腸球菌。
陰性結(jié)果：無色菌落或其他顏色菌落，均判定為非腸球菌。
若需確認(rèn)，可挑取特征菌落進(jìn)行生化試驗(yàn)或分子生物學(xué)鑒定。
三、注意事項(xiàng)
抑制劑具有毒性，操作時(shí)需戴手套，避免接觸皮膚和誤食；培養(yǎng)基廢液需滅菌后再處理。
培養(yǎng)基溶解后需及時(shí)使用，若暫時(shí)不用，可冷藏（2-8℃）保存，但保存時(shí)間不超過 24 小時(shí)，使用前需復(fù)溫至室溫。
培養(yǎng)溫度和時(shí)間需嚴(yán)格遵循說明書，溫度過高可能導(dǎo)致顯色底物失效，時(shí)間不足則菌落未充分顯色。
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