TGY瓊脂的前期準(zhǔn)備與滅菌處理及配制與使用方法！
小楊 / 2025-10-27 09:08:53
TGY瓊脂是一種常用的細(xì)菌培養(yǎng)基，主要成分為胰蛋白胨（Tryptone）、葡萄糖（Glucose）、酵母提取物（Yeast extract），廣泛用于細(xì)菌的分離、培養(yǎng)和計(jì)數(shù)等實(shí)驗(yàn)，其使用方法需遵循培養(yǎng)基操作的標(biāo)準(zhǔn)流程，具體步驟如下：
一、前期準(zhǔn)備
1、試劑與器材準(zhǔn)備
核心試劑：TGY 瓊脂干粉（按配方比例配置，通常每升蒸餾水對(duì)應(yīng)特定質(zhì)量的干粉，如常見(jiàn)配方為胰蛋白胨 10g、葡萄糖 5g、酵母提取物 5g、瓊脂 15-20g）、蒸餾水。
實(shí)驗(yàn)器材：錐形瓶、燒杯、玻璃棒、高壓蒸汽滅菌鍋、培養(yǎng)皿、無(wú)菌移液管、酒精燈、超凈工作臺(tái)等。
輔助用品：標(biāo)簽紙、記號(hào)筆、恒溫培養(yǎng)箱。
2、實(shí)驗(yàn)環(huán)境預(yù)處理
超凈工作臺(tái)提前 30 分鐘開(kāi)啟紫外燈消毒，使用前關(guān)閉紫外燈并通風(fēng) 10-15 分鐘；實(shí)驗(yàn)臺(tái)面用 75% 酒精擦拭消毒。
所有需滅菌的器材（如錐形瓶、移液管、培養(yǎng)皿等）需提前經(jīng)高壓蒸汽滅菌或干熱滅菌處理。
二、培養(yǎng)基配制
1、稱量與溶解
根據(jù)實(shí)驗(yàn)所需體積，準(zhǔn)確稱量 TGY 瓊脂干粉置于錐形瓶中，加入對(duì)應(yīng)量的蒸餾水（例如配制 500mL 培養(yǎng)基，需按配方比例減半稱量干粉，加入 500mL 蒸餾水）。
用玻璃棒攪拌均勻，必要時(shí)可置于水浴鍋中加熱（40-60℃），促進(jìn)干粉充分溶解，避免瓊脂結(jié)塊。
2、調(diào)節(jié) pH 值（可選）
若實(shí)驗(yàn)對(duì) pH 有特定要求（通常細(xì)菌培養(yǎng)適宜 pH 為 7.0-7.4），可在溶解后用 1mol/L HCl 或 1mol/L NaOH 調(diào)節(jié) pH，使用 pH 計(jì)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。
3、分裝與標(biāo)記
將溶解均勻的培養(yǎng)基分裝至錐形瓶中，分裝量不超過(guò)錐形瓶容積的 1/2，避免滅菌時(shí)溢出。
在錐形瓶上貼標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱（
TGY 瓊脂）、配制日期、配制人及濃度等信息。
三、滅菌處理
1、高壓蒸汽滅菌
將裝有培養(yǎng)基的錐形瓶用雙層紗布或硅膠塞封口（避免滅菌后污染），放入高壓蒸汽滅菌鍋。
設(shè)定滅菌參數(shù)：121℃、103.4kPa，維持 15-20 分鐘（若培養(yǎng)基體積較大，可適當(dāng)延長(zhǎng)滅菌時(shí)間，如 2000mL 培養(yǎng)基可延長(zhǎng)至 30 分鐘）。
2、滅菌后冷卻
滅菌結(jié)束后，待滅菌鍋內(nèi)壓力降至常壓、溫度降至 100℃以下時(shí)，緩慢打開(kāi)排氣閥，取出錐形瓶。
將錐形瓶置于超凈工作臺(tái)附近，自然冷卻至 50-60℃（手感不燙手為宜，避免溫度過(guò)高導(dǎo)致培養(yǎng)皿變形，或過(guò)低使瓊脂凝固無(wú)法倒平板）。
四、倒平板操作
1、培養(yǎng)皿準(zhǔn)備
取出滅菌后的培養(yǎng)皿，在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開(kāi)包裝，將培養(yǎng)皿倒置擺放（避免灰塵落入）。
2、倒平板流程
在超凈工作臺(tái)內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈，將錐形瓶瓶口靠近火焰滅菌（旋轉(zhuǎn)灼燒 3-5 秒）。
左手握住培養(yǎng)皿底部，右手持錐形瓶，緩慢將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿倒入約 15-20mL（確保培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底，無(wú)氣泡）。
倒完后迅速蓋上培養(yǎng)皿蓋，輕輕旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基分布均勻，避免產(chǎn)生氣泡。
3、凝固與儲(chǔ)存
將倒好的培養(yǎng)皿置于超凈工作臺(tái)內(nèi)，水平放置，待培養(yǎng)基自然凝固（約 30-60 分鐘，避免移動(dòng)導(dǎo)致表面不平整）。
若暫時(shí)不使用，凝固后可將培養(yǎng)皿倒置放入 4℃冰箱冷藏儲(chǔ)存，儲(chǔ)存時(shí)間不超過(guò) 1 周，使用前需提前取出恢復(fù)至室溫。
五、接種與培養(yǎng)
1、接種操作
依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇合適的接種方法，如涂布平板法、劃線分離法等。
以涂布平板法為例：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用無(wú)菌移液管吸取 0.1mL 菌液滴加到 TGY 瓊脂平板表面，用無(wú)菌玻璃涂布棒將菌液均勻涂抹在培養(yǎng)基表面，涂抹時(shí)避免用力刮擦培養(yǎng)基。
接種后，在培養(yǎng)皿蓋上標(biāo)記實(shí)驗(yàn)信息（菌株名稱、接種日期、培養(yǎng)條件等）。
2、恒溫培養(yǎng)
將接種后的培養(yǎng)皿倒置放入恒溫培養(yǎng)箱中（避免冷凝水滴落污染菌落），根據(jù)目標(biāo)細(xì)菌的生長(zhǎng)需求設(shè)定培養(yǎng)溫度和時(shí)間，例如多數(shù)細(xì)菌在 37℃下培養(yǎng) 18-24 小時(shí)，厭氧菌需在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。
六、后續(xù)觀察與處理
1、菌落觀察
培養(yǎng)結(jié)束后，取出培養(yǎng)皿，觀察菌落的形態(tài)、大小、顏色、邊緣等特征，進(jìn)行計(jì)數(shù)或分離純化。
2、實(shí)驗(yàn)后清理
實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，所有使用過(guò)的培養(yǎng)基（包括未接種的剩余培養(yǎng)基）需經(jīng)高壓蒸汽滅菌處理后，再進(jìn)行丟棄或回收，避免環(huán)境污染。
實(shí)驗(yàn)器材按常規(guī)方法清洗、滅菌，備用。
3、注意事項(xiàng)
瓊脂干粉溶解時(shí)需充分?jǐn)嚢?，避免未溶解的顆粒導(dǎo)致培養(yǎng)基凝固后出現(xiàn)不均一現(xiàn)象。
高壓蒸汽滅菌時(shí)需確保鍋內(nèi)空氣排盡，否則會(huì)影響滅菌效果；滅菌后避免快速排氣，防止培養(yǎng)基暴沸。
倒平板時(shí)溫度需控制在 50-60℃，溫度過(guò)高易燙傷實(shí)驗(yàn)人員，且可能殺死接種的菌液；溫度過(guò)低則瓊脂易凝固，無(wú)法順利倒平板。
接種過(guò)程需嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，避免雜菌污染，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
不同菌株的培養(yǎng)條件（溫度、時(shí)間、氧氣需求等）存在差異，需根據(jù)具體菌株調(diào)整培養(yǎng)參數(shù)。
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