實(shí)驗(yàn)室制備基礎(chǔ)培養(yǎng)基的材料準(zhǔn)備與具體步驟及注意事項(xiàng)！
小楊 / 2025-11-20 10:22:17
百歐博偉生物：實(shí)驗(yàn)室制備基礎(chǔ)培養(yǎng)基（以最常用的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基和營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基為例）的步驟如下，適用于大多數(shù)營養(yǎng)要求簡單的細(xì)菌（如
大腸桿菌、
葡萄球菌等）。
一、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（固體，用于細(xì)菌分離、純化、菌落觀察）
1、材料準(zhǔn)備
配方（1000mL）：
蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化鈉 5g、瓊脂 15-20g、蒸餾水 1000mL（pH 調(diào)至 7.2-7.4）。
儀器：電子天平、燒杯、玻璃棒、容量瓶、pH 試紙（或 pH 計(jì)）、高壓蒸汽滅菌鍋、錐形瓶、試管、滅菌平皿等。
2、具體步驟
（1）稱量與溶解
按配方準(zhǔn)確稱取蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉，放入燒杯中，加入約 800mL 蒸餾水。
用玻璃棒攪拌，加熱至完全溶解（牛肉膏較黏稠，需小火加熱并攪拌，避免糊底）。
加入瓊脂，繼續(xù)加熱攪拌至瓊脂完全溶解（瓊脂需煮沸才能溶解，過程中可能蒸發(fā)水分，可補(bǔ)加蒸餾水至接近 1000mL）。
（2）定容與調(diào) pH
將溶液轉(zhuǎn)移至 1000mL 容量瓶中，加蒸餾水定容至 1000mL，混勻。
用 1mol/L NaOH 或 1mol/L HCl 調(diào)節(jié) pH 至 7.2-7.4（用 pH 計(jì)精確測量，或用廣泛 pH 試紙粗略判斷）。
（3）分裝
將溶液分裝至錐形瓶（約占瓶容積的 1/3，避免滅菌時(shí)溢出），或直接分裝至試管（如需制作斜面），瓶口用棉塞或硅膠塞密封，外包牛皮紙。
（4）滅菌
高壓蒸汽滅菌：121℃、103.4kPa（1.05kg/cm²），滅菌 15-20 分鐘。
滅菌后取出，若分裝至試管，可趁熱傾斜試管（形成斜面，斜面長度約為試管長度的 1/2）；若為錐形瓶，待冷卻至 50-60℃（手感不燙手）時(shí)倒平板。
（5）倒平板
無菌操作：在超凈工作臺中，打開滅菌平皿，將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入平皿（每皿約 15-20mL），蓋好皿蓋。
待培養(yǎng)基凝固后（約 30 分鐘），倒置平皿（防止冷凝水滴落污染菌落），4℃冰箱保存?zhèn)溆茫纱娣?1-2 周）。
二、營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（液體，用于細(xì)菌增菌、生化試驗(yàn)或純培養(yǎng)）
1、材料準(zhǔn)備
配方（1000mL）：
蛋白胨 10g、牛肉膏 3g、氯化鈉 5g、蒸餾水 1000mL（pH 調(diào)至 7.2-7.4）。
儀器：與營養(yǎng)瓊脂相同（無需瓊脂，無需倒平板步驟）。
2、具體步驟
（1）稱量與溶解
稱取蛋白胨、牛肉膏、氯化鈉，加入 800mL 蒸餾水，攪拌加熱至完全溶解（無需加瓊脂，溶解更簡單）。
（2）定容與調(diào) pH
定容至 1000mL，調(diào)節(jié) pH 至 7.2-7.4（同固體培養(yǎng)基）。
（3）分裝與滅菌
分裝至試管或錐形瓶（液體高度約為容器的 1/3），滅菌條件：121℃、20 分鐘。
滅菌后冷卻至室溫，4℃保存?zhèn)溆茫纱娣?1-2 周）。
三、關(guān)鍵注意事項(xiàng)
1、無菌操作
培養(yǎng)基滅菌后倒平板、分裝時(shí)需在超凈工作臺中進(jìn)行，避免雜菌污染。
滅菌后的培養(yǎng)基若發(fā)現(xiàn)渾濁、沉淀或顏色異常，應(yīng)丟棄重配。
2、pH 調(diào)節(jié)
滅菌后培養(yǎng)基 pH 會略有下降（約 0.2-0.3），因此滅菌前 pH 可略高 0.2（如目標(biāo) 7.2，滅菌前調(diào)至 7.4）。
對 pH 敏感的細(xì)菌（如
乳酸菌），需精確控制 pH（用 pH 計(jì)測量）。
3、瓊脂用量
瓊脂用量決定培養(yǎng)基硬度：固體培養(yǎng)基用 1.5%-2% 瓊脂，半固體培養(yǎng)基用 0.3%-0.5% 瓊脂（用于觀察細(xì)菌動力）。
4、特殊處理
若培養(yǎng)基含熱不穩(wěn)定成分（如血清、抗生素），需先滅菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基，冷卻至 50℃左右時(shí)再無菌加入（即“過濾除菌”后添加）。
通過以上步驟，可制備出滿足基礎(chǔ)細(xì)菌培養(yǎng)需求的培養(yǎng)基。若需培養(yǎng)苛養(yǎng)菌，可在此基礎(chǔ)上添加血清、血液等成分（如血瓊脂 = 營養(yǎng)瓊脂 + 5%-10% 脫纖維羊血，滅菌后冷卻至 50℃時(shí)加入血液混勻倒平板）。
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