梭菌鑒定培養(yǎng)基（DCA）核心原理與培養(yǎng)現(xiàn)象及注意事項！
小楊 / 2025-12-02 09:53:26
1、選擇性抑制機制
培養(yǎng)基中的關(guān)鍵抑制成分及作用：
去氧膽酸鈉：屬于膽汁鹽類，可抑制革蘭氏陽性菌（除梭菌等耐膽汁的厭氧菌外）和部分非致病性革蘭氏陰性菌的生長，僅允許耐膽汁的梭菌、志賀菌/沙門菌等目標(biāo)菌繁殖。
檸檬酸鈉：一方面作為螯合劑，降低培養(yǎng)基中鈣離子濃度（抑制溶血性細菌的溶血作用干擾結(jié)果）；另一方面輔助調(diào)節(jié)滲透壓，增強對雜菌的抑制效果。
中性紅指示劑：pH 指示劑，酸性條件下（pH<6.8）呈紅色/粉紅色，中性/堿性條件下呈無色/淡黃色，用于判斷細菌是否發(fā)酵糖類產(chǎn)酸。
2、鑒別機制（核心：乳糖發(fā)酵特性）
DCA 中添加乳糖作為核心發(fā)酵底物，不同梭菌及腸道菌對乳糖的發(fā)酵能力差異是鑒別關(guān)鍵：
非致病性腸道菌（如
大腸埃希菌）：發(fā)酵乳糖產(chǎn)大量酸，使培養(yǎng)基 pH 降低；
志賀菌/沙門菌（非梭菌類目標(biāo)菌）：同樣不發(fā)酵乳糖，可通過后續(xù)生化試驗與梭菌區(qū)分。
DCA 培養(yǎng)后的典型現(xiàn)象（以梭菌為主）
菌落形態(tài)：圓形、凸起、邊緣整齊，直徑 2~4mm，表面光滑、半透明至不透明；
顏色：因不發(fā)酵乳糖，菌落呈無色/淡黃色（中性紅在中性 pH 下無色），菌落周圍培養(yǎng)基無顏色變化；
特殊現(xiàn)象：若培養(yǎng)基中添加血液（血平板版 DCA），可觀察到雙重溶血環(huán)（內(nèi)環(huán)完全溶血、外環(huán)不完全溶血），這是產(chǎn)氣莢膜梭菌的特征性表現(xiàn)。
2、艱難梭菌（Clostridioides difficile）
菌落形態(tài)：不規(guī)則、扁平、邊緣呈羽毛狀/鋸齒狀，直徑 3~5mm，表面粗糙、不透明；
顏色：不發(fā)酵乳糖，菌落及周圍培養(yǎng)基呈無色/淡灰色；
特殊現(xiàn)象：需嚴(yán)格厭氧環(huán)境培養(yǎng)，有氧條件下不生長，可通過 CCFA 培養(yǎng)基（環(huán)絲氨酸 - 頭孢西丁果糖瓊脂）進一步確認。
菌落形態(tài)：圓形、凸起、邊緣整齊，表面濕潤；
顏色：發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸，菌落及周圍培養(yǎng)基呈鮮紅色/粉紅色，易與梭菌區(qū)分。
菌落形態(tài)：圓形、較?。?~2mm）、半透明；
顏色：無色/淡黃色，無乳糖發(fā)酵相關(guān)的紅色變化，需通過動力試驗、硫化氫試驗等與梭菌鑒別（梭菌多有芽孢、無動力，沙門菌有動力、部分產(chǎn)硫化氫）。
關(guān)鍵注意事項
厭氧環(huán)境：梭菌為厭氧菌，DCA 培養(yǎng)梭菌時需置于厭氧罐/厭氧工作站（80% N?+10% H?+10% CO?），37℃培養(yǎng) 24~48h；若用于需氧菌（志賀菌/沙門菌），則需有氧/微需氧條件。
培養(yǎng)基 pH：配置后需調(diào)節(jié) pH 至 7.0~7.4，pH 過高/過低會導(dǎo)致指示劑失效或抑制目標(biāo)菌生長。
結(jié)果判讀：僅靠 DCA 形態(tài)無法完全鑒定梭菌，需結(jié)合生化試驗（如糖發(fā)酵試驗、酶活性檢測）、分子生物學(xué)方法（PCR 檢測毒素基因）確認。
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