空腸彎曲桿菌的培養(yǎng)條件與鑒定方法及致病性與應用場景！
小楊 / 2025-12-02 10:57:40
空腸彎曲桿菌（Campylobacter jejuni）是革蘭氏陰性、微需氧、彎曲桿狀細菌，屬于彎曲桿菌屬（Campylobacter），是全球范圍內引起急性腸胃炎的首要食源性致病菌之一。以下從生物學特性、培養(yǎng)條件、代謝特征、鑒定方法、致病性與應用場景等核心維度展開詳細解析，聚焦實踐操作與鑒定關鍵要點：
一、核心生物學特性（鑒定基礎）
1、形態(tài)與結構
形態(tài)：呈螺旋形或彎曲桿狀（0.2-0.5 μm × 0.5-5 μm），無芽孢，一端或兩端有單鞭毛（運動活潑，呈“螺旋式”運動，顯微鏡下易觀察）。
革蘭氏染色：陰性（注意：染色時需避免過度脫色，因細胞壁較薄，易出現(xiàn)假陽性）。
抵抗力：對氧氣敏感（微需氧），不耐熱（60℃ 10 分鐘可殺滅），對干燥、胃酸、常用消毒劑敏感；4℃冷藏條件下可存活數(shù)天（食品冷鏈中易傳播）。
2、基因組特征
基因組大小約 1.6-1.8 Mb，G+C 含量 30-35%（低 GC 特征，可作為分類輔助指標）。
攜帶多種毒力基因，與致病性密切相關。
二、培養(yǎng)條件（分離純化關鍵）
空腸彎曲桿菌為微需氧菌（最適氧氣濃度 5-10%，二氧化碳濃度 10%），營養(yǎng)需求較高，常規(guī)培養(yǎng)基需添加血液、血清等成分，分離時需抑制雜菌生長：
培養(yǎng)條件 具體要求
培養(yǎng)基 1.選擇性培養(yǎng)基：Skirrow 培養(yǎng)基、Campy-BAP 培養(yǎng)基；2.非選擇性培養(yǎng)基：布氏肉湯 + 5% 馬血/羊血（用于純培養(yǎng)擴增）。
培養(yǎng)環(huán)境 微需氧環(huán)境（可通過厭氧罐 + 微需氧產氣袋實現(xiàn)，或使用二氧化碳培養(yǎng)箱調節(jié)氣體比例）。
溫度與時間 最適溫度 42℃（嗜熱特性，區(qū)別于其他彎曲桿菌，如結腸彎曲桿菌最適 37℃），培養(yǎng) 48-72 小時。
菌落特征 42℃培養(yǎng)后，菌落呈圓形、凸起、光滑、濕潤，直徑 1-2 mm，顏色為灰色或乳白色，血平板上不溶血或輕微 α 溶血（無 β 溶血，可與鏈球菌區(qū)分）。
注意事項：
樣品處理：糞便、食品樣品需先接種選擇性增菌液，37℃預增菌 24 小時后，再轉種選擇性平板（提高分離率）；
避免氧氣暴露：接種后盡快放入微需氧環(huán)境，培養(yǎng)基表面可覆蓋石蠟油減少氧氣接觸；
溫度控制：嚴格控制 42℃培養(yǎng)，溫度過高（>45℃）或過低（<37℃）會導致細菌生長緩慢或不生長。
三、代謝特征（生化鑒定核心）
空腸彎曲桿菌生化反應不活潑，氧化酶、觸酶陽性是關鍵特征，具體生化指標如下：
生化試驗 結果
氧化酶 +（強陽性，滴加氧化酶試劑后 10 秒內出現(xiàn)紫色，可快速篩選）
觸酶 +（產生氣泡，區(qū)別于厭氧菌）
葡萄糖發(fā)酵 -（不發(fā)酵糖類，僅通過氨基酸、有機酸作為碳源）
硫化氫產生 -（TSI 培養(yǎng)基中不產 H?S，區(qū)別于沙門氏菌）
脲酶 -（區(qū)別于幽門螺桿菌，幽門螺桿菌脲酶陽性）
硝酸鹽還原 +（還原硝酸鹽為亞硝酸鹽）
馬尿酸水解 +（關鍵鑒別特征，95% 以上空腸彎曲桿菌陽性，結腸彎曲桿菌、直腸彎曲桿菌陰性）
四、鑒定方法（從初篩到確認）
1、傳統(tǒng)鑒定流程（實驗室常規(guī)方法）
樣品處理
選擇性增菌（48h, 37℃）
轉種Skirrow/Campy-BAP平板（42℃, 微需氧, 48h）
菌落形態(tài)觀察（灰色、光滑、不溶血）
革蘭氏染色（陰性彎曲桿菌）+ 動力觀察（螺旋式運動）
生化試驗（氧化酶+、觸酶+、馬尿酸水解+）
最終鑒定為空腸彎曲桿菌
2、分子生物學鑒定（精準快速，適用于批量檢測）
PCR 技術：
靶基因：hipO 基因（空腸彎曲桿菌特異性基因，編碼組氨酸磷酸酶，其他彎曲桿菌無）、flaA 基因（鞭毛基因，可用于分型）；
引物示例（hipO）：上游 5'-GCT TTA TTT GTT GGG TTA CG-3'，下游 5'-CCA CTA TTT TTA AAT TGC GC-3'，擴增產物約 340 bp；
優(yōu)勢：靈敏度高（可檢測 10² CFU/mL），耗時僅 4-6 小時，適用于食品、臨床樣品快速篩查。
測序鑒定：
16S rRNA 基因測序（通用引物 27F/1492R 擴增，測序后與 GenBank 數(shù)據(jù)庫比對，相似度≥97% 可確認屬，≥99% 可確認種）；
multilocus sequence typing（MLST）：基于 7 個管家基因（aspA、glnA 等）測序分型，用于流行病學溯源。
3、血清學鑒定（分型輔助）
基于 O 抗原（脂多糖抗原）分為多個血清型，常用玻片凝集試驗（使用特異性抗血清），適用于菌株流行病學分類，但操作較繁瑣，臨床應用較少。
五、致病性與臨床意義
1、致病機制
黏附與侵襲：通過鞭毛運動到達腸道上皮細胞，經 cadF 基因編碼的蛋白黏附，ciaB 基因介導侵襲進入細胞內繁殖，導致細胞損傷；
毒素釋放：產生細胞毒素，破壞腸道上皮細胞，引起炎癥反應。
2、臨床癥狀
潛伏期 2-5 天，主要表現(xiàn)為急性腸胃炎：腹痛、腹瀉、發(fā)熱（38-40℃），部分患者伴有惡心、嘔吐；
并發(fā)癥：少數(shù)患者（約 1/1000）感染后 1-4 周可出現(xiàn)吉蘭 - 巴雷綜合征、反應性關節(jié)炎等。
3、傳播途徑
主要通過食源性傳播（食用未煮熟的雞肉、牛肉、豬肉，或污染的牛奶、水源）；
接觸傳播（如接觸感染家禽、寵物，或患者糞便污染的環(huán)境）。
六、應用場景與質量控制
1、主要應用領域
臨床診斷：腹瀉患者糞便樣品中分離鑒定
空腸彎曲桿菌，明確病因；
食品衛(wèi)生檢測：雞肉、生鮮肉類、乳制品的微生物污染篩查（我國 GB 2760-2014 規(guī)定，食品中空腸彎曲桿菌不得檢出）；
流行病學調查：通過 MLST 分型追蹤疫情來源，分析傳播鏈。
2、鑒定質量控制要點
陽性對照：使用標準菌株（如
ATCC 33560）進行平行培養(yǎng)，確保培養(yǎng)基、試劑、儀器正常；
分子檢測質控：PCR 反應中加入內參基因，排除抑制物干擾導致的假陰性。
七、與相似菌株的鑒別要點
空腸彎曲桿菌易與其他彎曲桿菌屬菌株（如結腸彎曲桿菌、直腸彎曲桿菌）及幽門螺桿菌混淆，關鍵鑒別特征如下：
菌株 關鍵鑒別特征
空腸彎曲桿菌 42℃生長（+）、馬尿酸水解（+）、脲酶（-）、氧化酶（+）
結腸彎曲桿菌 42℃生長（-）、馬尿酸水解（-）、醋酸吲哚水解（+）
直腸彎曲桿菌 42℃生長（-）、馬尿酸水解（-）、醋酸吲哚水解（-）
幽門螺桿菌 脲酶（+）、微需氧但最適 37℃生長、不溶血、對萬古霉素敏感（空腸彎曲桿菌耐藥）
八、總結
空腸彎曲桿菌的鑒定核心圍繞嗜熱微需氧特性、典型生化反應（氧化酶 +、馬尿酸水解 +）、分子特異性基因檢測展開。實踐中需注意樣品前處理的增菌步驟、培養(yǎng)環(huán)境的氧氣控制，結合傳統(tǒng)生化與分子方法可實現(xiàn)精準鑒定。該菌作為食源性致病菌，其快速檢測與分型對臨床治療、食品安全防控具有重要意義。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產品需求者的極優(yōu)質服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網中獲得最優(yōu)質服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關系！
下載附件
上一篇：梭菌鑒定培養(yǎng)基（DCA）核心原理與培養(yǎng)現(xiàn)象及注意事項！
下一篇：大腸埃希氏菌平板計數(shù)培養(yǎng)的原理與操作步驟及結果判讀！