微生物培養(yǎng)基平板制備與儲存的核心原理及標(biāo)準(zhǔn)操作方法！
小楊 / 2025-12-19 10:24:00
百歐博偉生物：培養(yǎng)基平板是微生物分離、純化、計數(shù)及鑒定的核心載體，其制備質(zhì)量直接影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，儲存方法則決定平板的保質(zhì)期和使用效果。以下是原理、操作方法、注意事項、常見問題及解決方案的完整知識包。
一、平板制備的核心原理
將滅菌后的液態(tài)培養(yǎng)基（瓊脂濃度通常為 1.5%~2.0%，此濃度可在常溫下凝固形成固體基質(zhì)），在無菌條件下傾注到無菌培養(yǎng)皿中，冷卻凝固后形成均勻、平整的固體培養(yǎng)基表面，為微生物的生長提供營養(yǎng)和附著載體。
二、平板制備的標(biāo)準(zhǔn)操作方法
1、前期準(zhǔn)備
材料準(zhǔn)備：
培養(yǎng)基粉末（按配方選擇，如 LB 培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂等）、去離子水/蒸餾水
無菌培養(yǎng)皿（直徑通常為 90mm，提前滅菌，干燥備用）
錐形瓶、封口膜、高壓蒸汽滅菌鍋、超凈工作臺、酒精燈、玻璃涂布棒
培養(yǎng)基配制：
按配方比例稱取培養(yǎng)基粉末和水，加入錐形瓶中，攪拌至粉末完全溶解。
用封口膜密封錐形瓶瓶口（保留透氣孔），標(biāo)記培養(yǎng)基名稱、配制日期。
2、培養(yǎng)基滅菌
將錐形瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋，設(shè)置參數(shù)：121℃、103.4kPa、15~20min（含糖培養(yǎng)基可適當(dāng)降低溫度至 115℃，滅菌 20~30min，避免糖分焦化）。
滅菌結(jié)束后，待滅菌鍋壓力降至 0，緩慢打開鍋蓋，取出錐形瓶。
3、傾注平板（無菌操作核心步驟）
將滅菌后的培養(yǎng)基錐形瓶置于超凈工作臺中，待培養(yǎng)基溫度降至 50~55℃（此溫度既能避免瓊脂提前凝固，又能防止高溫殺死待接種的熱敏性微生物，同時降低培養(yǎng)皿冷凝水產(chǎn)生）。
點燃酒精燈，手持錐形瓶，在火焰旁打開封口膜；另一只手拿起無菌培養(yǎng)皿，開蓋角度不超過 45°（減少空氣微生物污染）。
向每個培養(yǎng)皿中傾注 15~20mL 培養(yǎng)基，輕輕晃動培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻覆蓋皿底。
蓋上培養(yǎng)皿蓋，在超凈工作臺中靜置冷卻 30~60min，直至培養(yǎng)基完全凝固。
凝固后的平板倒置（防止皿蓋冷凝水滴落污染培養(yǎng)基表面），標(biāo)記相關(guān)信息。
三、平板的儲存方法
1、短期儲存（1 周內(nèi)）
條件：2~8℃ 冰箱冷藏，用保鮮袋或密封盒包裝，防止平板干燥和交叉污染。
注意：儲存時保持平板倒置，避免冷凝水積聚在培養(yǎng)基表面。
2、長期儲存（1~3 個月，適用于特定培養(yǎng)基）
對于含抗生素、血清等不穩(wěn)定成分的平板，需在 -20℃ 冷凍儲存，使用前提前轉(zhuǎn)移至 2~8℃解凍，解凍后一次性用完，不可反復(fù)凍融。
普通培養(yǎng)基平板不建議長期冷凍，易導(dǎo)致瓊脂龜裂、營養(yǎng)成分破壞。
3、儲存后的檢查
取用前需觀察平板：培養(yǎng)基表面應(yīng)平整、無裂痕、無肉眼可見的菌落、無冷凝水；若出現(xiàn)污染、干燥或顏色變化，應(yīng)廢棄。
四、關(guān)鍵注意事項
1、無菌操作控制
超凈工作臺使用前需紫外滅菌 30min，通風(fēng) 10min 后再操作；操作人員需穿無菌服、戴手套，避免手部直接接觸培養(yǎng)皿和培養(yǎng)基。
傾注過程全程在火焰旁進行，減少空氣微生物落入。
2、溫度控制
培養(yǎng)基溫度過高：易燙壞培養(yǎng)皿、產(chǎn)生大量冷凝水，且接種后可能殺死微生物；溫度過低：瓊脂提前凝固，無法形成均勻平板。
3、培養(yǎng)基用量
90mm 培養(yǎng)皿傾注 15~20mL，厚度適中；用量過少易導(dǎo)致平板干燥，用量過多則凝固時間延長，且菌落生長過于密集。
4、特殊培養(yǎng)基處理
含抗生素、維生素等熱敏性成分的培養(yǎng)基，需在滅菌后冷卻至 50℃左右，無菌操作加入過濾除菌的添加劑，再傾注平板。
五、常見問題及解決方案
常見問題 原因分析 解決方案
平板表面出現(xiàn)雜菌菌落 1.培養(yǎng)基滅菌不徹底；2.超凈工作臺無菌環(huán)境不達標(biāo)；3.傾注時操作不當(dāng) 1.驗證滅菌鍋參數(shù)，確保滅菌徹底；2.定期檢測超凈工作臺潔凈度；3.嚴(yán)格在火焰旁操作，培養(yǎng)皿開蓋角度不宜過大
培養(yǎng)基凝固后出現(xiàn)龜裂 1.瓊脂濃度過高；2.冷卻速度過快；3.平板儲存時干燥過度 1.調(diào)整瓊脂比例至 1.5%~2.0%；2.室溫緩慢冷卻，避免低溫驟冷；3.儲存時密封保濕
平板表面有大量冷凝水 1.培養(yǎng)基傾注溫度過高；2.冷卻時未在無菌環(huán)境靜置 1.待培養(yǎng)基冷卻至 50~55℃再傾注；2.超凈工作臺中靜置冷卻，減少溫差
培養(yǎng)基無法凝固 1.瓊脂濃度過低；2.滅菌時間過長導(dǎo)致瓊脂分解；3.pH 值過低 1.按配方調(diào)整瓊脂用量；2.嚴(yán)格控制滅菌時間和溫度；3.配制時調(diào)節(jié)培養(yǎng)基 pH 至適宜范圍
六、應(yīng)用范圍
培養(yǎng)基平板廣泛用于微生物的分離純化（如稀釋涂布平板法、平板劃線法）、活菌計數(shù)（菌落形成單位 CFU 計算）、菌種鑒定（選擇性培養(yǎng)基、鑒別性培養(yǎng)基平板）及藥敏試驗等實驗。
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