沙門氏菌血清學(xué)鑒定的前期準(zhǔn)備與操作過程及結(jié)果判斷！
小楊 / 2025-12-26 09:36:41
沙門氏菌血清學(xué)鑒定的核心操作是玻片凝集法，部分可疑菌株需結(jié)合試管凝集法復(fù)核，操作過程圍繞 O 抗原定型→Vi 抗原驗(yàn)證（必要時(shí)）→H 抗原定型 的順序展開，具體步驟如下：
一、前期準(zhǔn)備
1、菌株純化
將待檢菌株接種于營養(yǎng)瓊脂或血瓊脂平板，37℃培養(yǎng) 18~24h，挑取單個(gè)光滑型菌落進(jìn)行純培養(yǎng)，確保無雜菌污染。
老化菌落抗原活性會下降，優(yōu)先選擇新鮮培養(yǎng)物。
2、試劑與器材準(zhǔn)備
試劑：
沙門氏菌成套診斷血清（O 多價(jià)、O 單價(jià)、H 多價(jià)、H 單相、Vi 抗原血清）、無菌生理鹽水。
器材：潔凈載玻片、接種環(huán)、酒精燈、記號筆、恒溫箱（或水浴鍋，用于 Vi 抗原破壞）。
3、Vi 抗原預(yù)處理（預(yù)判性操作）
若待檢菌株疑似
傷寒沙門氏菌、
丙型副傷寒沙門氏菌，挑取菌落混懸于生理鹽水，100℃水浴加熱 30min，破壞可能覆蓋 O 抗原的 Vi 抗原；或先做 Vi 抗原定型，陽性菌株再加熱處理。
二、核心操作：玻片凝集法
（一）O 抗原定型（分群依據(jù)）
玻片分區(qū)：取潔凈載玻片，用記號筆劃分 2 個(gè)區(qū)域（約 2cm×2cm），標(biāo)記“試驗(yàn)孔”和“陰性對照孔”。
加樣：試驗(yàn)孔滴加 1 滴O 多價(jià)診斷血清，陰性對照孔滴加 1 滴無菌生理鹽水。
菌液混懸：用滅菌接種環(huán)挑取待檢菌菌落，分別在試驗(yàn)孔和對照孔中輕輕研磨，使菌液與血清/生理鹽水充分混勻，形成均勻菌懸液。
反應(yīng)與觀察：輕輕晃動玻片（頻率約 1 次/秒），在室溫（20~25℃）下觀察 1~2min。
陽性結(jié)果：試驗(yàn)孔出現(xiàn)肉眼可見的顆粒狀凝集，液體變澄清；對照孔無凝集，菌懸液呈均勻渾濁。
陰性結(jié)果：試驗(yàn)孔與對照孔均無凝集，需重新試驗(yàn)或確認(rèn)是否為 Vi 抗原阻斷。
單價(jià)血清定型：O 多價(jià)血清凝集陽性的菌株，再用O 單價(jià)診斷血清逐一檢測，確定具體 O 抗原群。
（二）Vi 抗原定型（針對 O 抗原陰性菌株）
玻片分區(qū)標(biāo)記“Vi 試驗(yàn)孔”和“生理鹽水對照孔”。
試驗(yàn)孔滴加 1 滴Vi 抗原診斷血清，對照孔滴加生理鹽水，混懸菌落后觀察 1~2min。
若試驗(yàn)孔出現(xiàn)凝集，判定為Vi 抗原陽性；此時(shí)需將菌株加熱處理后，重新進(jìn)行 O 抗原定型。
（三）H 抗原定型（分型依據(jù)）
H 抗原分第 1 相（特異相） 和第 2 相（非特異相），雙相菌需誘導(dǎo)相轉(zhuǎn)變，操作如下：
相誘導(dǎo)處理：將待檢菌接種于半固體培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng) 24h，取培養(yǎng)基邊緣的菌落（易表達(dá)第 2 相 H 抗原）進(jìn)行檢測；中心菌落多表達(dá)第 1 相 H 抗原。
多價(jià)血清篩選：玻片分區(qū)，試驗(yàn)孔加 1 滴H 多價(jià)診斷血清，對照孔加生理鹽水，混懸菌落后觀察凝集反應(yīng)。
單相血清定型
多價(jià)血清陽性的菌株，先使用第 1 相 H 單價(jià)血清檢測，確定特異相抗原。
再使用第 2 相 H 單價(jià)血清檢測，確定非特異相抗原。
結(jié)果判定
僅與某一相血清凝集 → 單相菌。
與兩相血清均凝集 → 雙相菌。
三、結(jié)果復(fù)核：試管凝集法（針對不典型菌株）
若玻片凝集結(jié)果微弱或可疑，采用試管凝集法定量驗(yàn)證，步驟如下：
稀釋血清：將診斷血清用生理鹽水做倍比稀釋，分裝于試管中。
加菌液：每管加入等量標(biāo)準(zhǔn)濃度菌懸液，混勻后 37℃水浴過夜。
觀察結(jié)果：以出現(xiàn)明顯凝集的最高血清稀釋度為該菌株的凝集效價(jià)，效價(jià)≥1:80 判定為陽性。
四、最終血清型確定
根據(jù) O 抗原群 + H 抗原相型 的組合，對照《沙門氏菌血清分型表》，確定菌株的具體血清型（如
傷寒沙門氏菌：O9，Hd；
豬霍亂沙門氏菌：O6,7，Hc:1,5）。
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