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細(xì)胞凍存方法與復(fù)蘇
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2013-05-13 05:40:28

   細(xì)胞凍存方法與復(fù)蘇中國微生物菌種查詢網(wǎng)為您解答:


 一)細(xì)胞凍存方法

將貼壁細(xì)胞消化后離心收集,懸浮細(xì)胞直接離心收集,以完全培養(yǎng)基或胎牛血清重懸細(xì)胞至終濃度約106/ml。加入10%的DMSO。以每管1~2ml分裝至凍存管中。用絕熱材料包裹置-70攝氏度冰箱冷凍過夜。次日保存到液氮中。

二)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

應(yīng)遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37~37.5℃,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。

1000g離心5min,棄上清,加入1ml新鮮完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

在無菌臺(tái)內(nèi)取適量完全培養(yǎng)基加入培養(yǎng)瓶內(nèi),然后用無菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。


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