IEC-6 ， 大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞
微生物菌種查詢網(wǎng) / 2015-03-24 08:02:00
細(xì)胞系描述
細(xì)胞庫(kù)編號(hào)：KCB200720YJ
種屬：大鼠
組織來源：小腸
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特征：上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞特性：該細(xì)胞表達(dá)腸上皮特有抗原。20代以前能保持恒定的生長(zhǎng)速度和細(xì)胞形態(tài)，此后細(xì)胞生長(zhǎng)速度會(huì)減慢，細(xì)胞形態(tài)也會(huì)發(fā)生改變。氫化可的松可抑制該細(xì)胞的生長(zhǎng)。
培養(yǎng)條件：完全培養(yǎng)基： DMEM95%(內(nèi)含2mM Glutamin)+5%胎牛血清+100ug/ml insulin（細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢后，血清濃度可加到10%）。
血清我們推薦用:
GIBCOFBS-10099-141或HYCLONEFBS-SH30084.03。用質(zhì)量不好的血清不能保證此細(xì)胞會(huì)有好的生長(zhǎng)狀態(tài).
培養(yǎng)條件：37 ℃，CO2：5%
傳代方法：
收到細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：
如果細(xì)胞未長(zhǎng)滿，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，吸出培養(yǎng)液，換 10ml新鮮培養(yǎng)液后繼續(xù)培養(yǎng)。
如果細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá)80-90%），即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：
1. 棄去培養(yǎng)液，用不含鈣、鎂離子的PBS洗1-2次。
2. 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37℃培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后將培養(yǎng)瓶翻過來讓胰酶與細(xì)胞面接觸大約10-30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量完全培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶（25cm2）補(bǔ)加完全培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出一半，分到新的培養(yǎng)瓶中。如果沒有特別說明，收到細(xì)胞后的第一次傳代一般是一傳二。
注：1、觀察細(xì)胞最好在低倍鏡（4或5X物鏡)下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度?？醇?xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X或20X物鏡下。
2、瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用,請(qǐng)換用加雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后,培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。
3、有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。
4、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。
凍存方法：
凍存液：90%完全培養(yǎng)液，10%DMSO（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)），現(xiàn)用現(xiàn)配。
儲(chǔ) 存：
液氮。
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