一、細胞簡介
平臺編號：Bio-133634
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：AlphaTC1clone6
細胞名稱：alphaTC1clone6鼠胰島素瘤胰島a細胞
產(chǎn)品類別：人源細胞系
生長特性：貼壁生長
培養(yǎng)體系：DMEM（高糖）+10%FBS
傳代方法：1：2傳代
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
凍存條件：無血清細胞凍存液
保存條件：95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、細胞傳代
1、細胞密度約 80%時，吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS 緩沖液潤洗細胞兩次，加 2~3 ml 0.25%胰酶進行消化細胞（注意根據(jù)實際情況，把握消化時間）。
2、鏡下觀察消化情況，在細胞邊緣縮小，貼壁松動時（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細胞層某處，即可肉眼可見細胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉胰酶，加 3~4ml 完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細胞層，把細胞層吹落，吹散。
3、取部分細胞懸液轉移到新的培養(yǎng)皿中，添加適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4、注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或者凍存。
三、細胞復蘇
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。*天換液并檢查細胞密度。
四、細胞凍存
待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。
下面T25瓶為例;
1、細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。
3、將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
五、注意事項
1、細胞簽收后，請盡快確認細胞狀態(tài)（平放靜置半小時后鏡下查看）。若細胞狀態(tài)不佳，請當天盡快拍照反饋，以便實驗室及時售后跟蹤處理。細胞簽收后若未及時聯(lián)系，視為默認細胞狀態(tài)正常。
2、收到細胞后請盡快更換于我司訂購的配套完全培養(yǎng)基，或自己配置的新鮮培養(yǎng)基（含 15%血清），如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間最長不宜超過 72 小時）。
3、貼壁細胞收到當天切忌立刻消化，請將細胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育過夜到第二天再做消化傳代。若簽收的細胞密度較高，可及時拍照反饋，實驗室會根據(jù)細胞實際情況給予操作建議。
4、細胞具有密度依賴性,首次傳代（密度 80%），建議 1：2 傳代（保持細胞密度），且優(yōu)先選擇d=6cm 的培養(yǎng)皿。
5、關于雙抗，本實驗室在細胞培養(yǎng)過程中不添加雙抗，用戶可根據(jù)自己實驗室具體情況選擇添加雙抗（100U/ml 青霉素＋100U/ml 鏈霉素）?！禤S 本實驗室自主研發(fā)的抗生素，可有效效清除廣大實驗室普發(fā)的黑膠蟲，支原體，細菌，真菌等污染，如有需求，請咨詢銷售人員?！?br />
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