葡萄牙棒孢酵母是Clavispora屬的微生物，原產(chǎn)地為中國。菌落奶油狀，乳白色，粘稠，邊緣平滑，表面平坦，反光。細(xì)胞橢圓形，大小不一，單生或?qū)ι?，芽殖。主要用途為研究；生產(chǎn)，具體用途為生物轉(zhuǎn)化富馬酸生產(chǎn)L-蘋果酸,富馬酸酶活力2000U/g濕細(xì)胞。
一、菌種簡介
平臺編號：Bio-63879
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Clavispora Lusitaniae
中文名稱：葡萄牙棒孢酵母
屬名：Clavispora
種名加詞：lusitaniae
來源歷史：←天津市工業(yè)微生物研究所(2.11151)
收藏時間：2006.11.10
資源歸類編碼：15151115101
模式菌株：非模式菌株
主要用途：研究
生物危害程度：四類
致病對象：無
培養(yǎng)基：*12 Brix. 麥芽汁 1.0L，瓊脂 15.0g，pH自然。[注] 麥芽汁制備：大麥芽若干，粉碎后，加入4倍于麥芽重量的水，攪拌均勻，在55～60℃保溫箱內(nèi)糖化4h，取出過濾，得麥芽汁，測量此麥芽汁的體積和濃度后，分裝于已滅菌的三角瓶中，0.6kg/cm2滅菌40min備用，用時將濾液稀釋至所需糖度。
培養(yǎng)溫度：25-28℃
資源保藏類型：培養(yǎng)物
保存方法：真空冷凍干燥法
實物狀態(tài)：有實物
共享方式：公益性共享；資源純交易性共享；合作研究共享；資源交換性共享
用途：研究；
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準(zhǔn)）
二、儲存條件
凍干菌種和試管斜面請置于 2℃～8℃冷藏。西林瓶菌種請置于-18℃～-33℃冷凍。
三、培養(yǎng)條件
1、培養(yǎng)基編號：CM0077 5 °Bé麥芽汁瓊脂
2、培養(yǎng)基成分：5°Bé麥芽汁 1.0L（或用 MEB 代替），瓊脂 15.0g，自然 pH。推薦使用商品化成品培養(yǎng)基。
3、需氧類型：好氧
4、培養(yǎng)溫度：25℃
四、培養(yǎng)方法
1、平板劃線分離法:把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細(xì)胞用接種環(huán)圈在平板培養(yǎng)基表面,通過分區(qū)劃線稀釋而得到較多獨立分布的單個細(xì)胞,經(jīng)培養(yǎng)后生長繁殖成單菌落。
2、稀釋涂布平板法將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋,然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面進(jìn)行培養(yǎng),在稀釋度足夠高的菌液里,聚集在一起的微生物將被分散成單個細(xì)胞,從而能在培養(yǎng)基表面形成單個菌落。
上述兩種方法雖然都可以實現(xiàn)觀察菌落特征的目的,但平板劃線分離法不能對菌落計數(shù),而稀釋涂布平板法培養(yǎng)過程復(fù)雜,對平板的要求比較高,可參照以下步驟:
a、制備平板培養(yǎng)基將氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基加熱溶化并冷卻至65℃,向氯化鈉蔗糖瓊脂培養(yǎng)基中加入克林霉素溶液3~5ml并混合均勻,然后取20ml混合均勻的培養(yǎng)基溶液倒入培養(yǎng)皿,輕輕搖動培養(yǎng)皿,使培養(yǎng)基溶液均勻分布在培養(yǎng)皿底部,待培養(yǎng)基溶液凝固后即得平板培養(yǎng)基。
b、制備活性污泥混合液稱取活性污泥土樣15g,放入盛100ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中,振搖15~20min混合均勻,用一支1ml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻,制成活性污泥混合液。
c、培養(yǎng)基涂布從活性污泥混合液中吸取0.2ml,滴在平板培養(yǎng)基表面的中央位置,用無菌玻璃涂棒將活性污泥混合液沿同心圓方向輕輕地向外擴展,使之分布均勻。
五、注意事項
1、菌種常規(guī)培養(yǎng)時間：細(xì)菌 1-2 天，酵母 3 天，霉菌 5-7 天，大型真菌 7-10 天。
2、試管斜面菌種請盡快轉(zhuǎn)接，不建議長期存放。
3、初次使用時請按照本說明書推薦條件進(jìn)行復(fù)活培養(yǎng)，如使用其它類型培養(yǎng)基或培養(yǎng)條件造成菌種不活等損失，我單位不負(fù)責(zé)任。
4、使用者應(yīng)保證菌種的安全存儲和操作，帶菌廢棄物應(yīng)高壓滅菌處理后丟棄。
5、與菌種相關(guān)的其它信息請參閱微生物菌種查詢網(wǎng)網(wǎng)站(www.family998.com）。
六、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂（應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇），用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml（建議勿超過 0.5ml）適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂)，滴入管內(nèi)，輕輕振蕩，待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀，將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻，可將殘留在吸管中的 1-2 滴菌懸液轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上。將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng)，以液體培養(yǎng)結(jié)果為準(zhǔn)。
3、凍干管打開后需一次用完，不能留存。另外，安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護(hù)劑，里面菌體為少數(shù)，復(fù)蘇時要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上，否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行，生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作，打管時凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部，保護(hù)眼睛。
5、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行，用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
6、菌種復(fù)蘇時，請務(wù)必記錄好菌種的編號和制備批號，如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況，請在收到菌鐘后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理。
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