細(xì)胞簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào)：Bio-134813
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細(xì)胞信息：MDA-MB-231/ADM
細(xì)胞名稱：人乳腺癌細(xì)胞
完全培養(yǎng)基：Gibco(90%L15+0.5-4ug/ML-ADM+10%FBS)
生長(zhǎng)特性：貼壁
培養(yǎng)溫度：37℃
生長(zhǎng)代數(shù)：P4
空氣條件：5%CO2，,95%AIR
凍存條件：50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基、40%FBS、10%DMSO
產(chǎn)品規(guī)格：細(xì)胞一瓶（T25）
細(xì)胞傳代流程：此細(xì)胞受藥物刺激，貼壁性較差，該狀態(tài)不影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行
用途：研究
注意事項(xiàng)：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn)）
細(xì)胞傳代流程 此細(xì)胞受藥物刺激，貼壁性較差，該狀態(tài)不影響實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。
細(xì)胞密度約 80%時(shí)，收集原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，離心收集懸浮細(xì)胞，PBS 緩沖液潤(rùn)洗貼壁細(xì)胞兩次，加 1--2ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（此時(shí)間僅供參考，注意根據(jù)實(shí)際情況，把握消化時(shí)間）。
鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（約 1min）（可用吸管吸起些許胰酶輕輕吹打細(xì)胞層某處，即可肉眼可見細(xì)胞層脫落，或吹打后鏡下觀察吹打處，即消化完成，否則繼續(xù)消化）直接吸掉胰酶，加 3~4ml 完全培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，把細(xì)胞層吹落，吹散。
取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細(xì)胞密度長(zhǎng)約 70%，可往細(xì)胞添加 0.5ug/mlADM，次日觀察細(xì)胞狀態(tài)，如細(xì)胞狀態(tài)不受影響，可連續(xù)加藥兩天，觀察細(xì)胞狀態(tài)，撤藥一天后繼續(xù)加藥培養(yǎng)，后續(xù)加藥可根據(jù)細(xì)胞情況進(jìn)行濃度遞增（遞增濃度為：0.5ug/ml，1ug/ml，1.5ug/ml，2ug/ml，3ug/ml，4ug/ml），加藥過(guò)程中，如細(xì)胞變差則需及時(shí)撤藥，注意，細(xì)胞對(duì)藥物反應(yīng)會(huì)有滯后性，請(qǐng)間歇加藥施壓，不建議連續(xù)加藥,因各實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)環(huán)境區(qū)別，首次加藥因謹(jǐn)慎藥物濃度，應(yīng)從稍低濃度加起，待細(xì)胞適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境再提升濃度請(qǐng)考慮各實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)體系差異，慎重使用藥物濃度。
注意培養(yǎng)基 PH 值變化情況，定期換液（每周 2-3 次），待細(xì)胞密度達(dá)到 80%以后重復(fù) 1 項(xiàng)操作或者凍存。
收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快更換為含 15%血清的新鮮培養(yǎng)基
細(xì)胞簽收后，請(qǐng)盡快確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)（平放靜置半小時(shí)后鏡下查看）。若細(xì)胞狀態(tài)不佳，請(qǐng)當(dāng)天盡快拍照反饋，以便實(shí)驗(yàn)室及時(shí)售后跟蹤處理。細(xì)胞簽收后若未及時(shí)聯(lián)系，視為默認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)正常。
貼壁細(xì)胞如快遞路上耗時(shí) 1-2 天，可根據(jù)簽收時(shí)的細(xì)胞密度，狀態(tài)進(jìn)行處理（如細(xì)胞密度有 80--90%，細(xì)胞輪廓清晰，透亮，即細(xì)胞快遞受損極少，可當(dāng)天消化傳代）；耗時(shí) 3天及更久，收到當(dāng)天切忌立刻消化，請(qǐng)將細(xì)胞換液后放置培養(yǎng)箱孵育過(guò)夜到第二天再做消化傳代。
首次傳代（密度 80%），建議 1：2 傳代（保持細(xì)胞密度），且優(yōu)先選擇 d=6cm 的培養(yǎng)皿。
關(guān)于雙抗，本實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中不添加雙抗，用戶可根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)室具體情況選擇添加雙抗（100U/ml 青霉素＋100U/ml 鏈霉素）。
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