一、背景
大鼠腹腔巨噬細(xì)胞是一種常用的細(xì)胞模型，在生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究中廣泛使用。這些細(xì)胞來(lái)自SD大鼠（出生2-3周），通常從其腹腔中提取并用于實(shí)驗(yàn)。
這些細(xì)胞具有巨噬細(xì)胞的特性，可以吞噬和消化細(xì)胞碎片和外來(lái)物質(zhì)。它們?cè)谂囵B(yǎng)中通常貼壁生長(zhǎng)，形態(tài)為巨噬細(xì)胞樣。這種細(xì)胞系是非常受歡迎的實(shí)驗(yàn)工具，尤其是在研究免疫反應(yīng)、炎癥和細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面。
這些細(xì)胞的生長(zhǎng)需要特定的培養(yǎng)基，如DMEM高糖培養(yǎng)基，其中包含胎牛血清、巨噬細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、青霉素和鏈霉素等。這些培養(yǎng)基的配方旨在提供最佳的生長(zhǎng)條件，以支持大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的生長(zhǎng)和維持。
此外，這些細(xì)胞的污染檢測(cè)結(jié)果為陰性，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等有害物質(zhì)。因此，這些細(xì)胞可以安全地在實(shí)驗(yàn)室中使用，不會(huì)引入額外的污染風(fēng)險(xiǎn)。
二、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞操作規(guī)程
1、培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
2、大鼠腹腔巨噬細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。*天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。產(chǎn)品僅供科研使用
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
三、應(yīng)用
大鼠腹腔巨噬細(xì)胞可以用于他汀類藥物對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1及TIMP-1的影響：
急性冠脈綜合征(ACS)是一組嚴(yán)重威脅人類健康的疾病,包括不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗死(有Q波及無(wú)Q波心肌梗死)及心源性猝死,他汀類藥物在減少急性冠狀動(dòng)脈事件的發(fā)生率及冠心病的死亡率方面,取得了令人矚目的成就,但他汀類藥物抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)理尚不十分清楚,本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察阿托伐他汀(立普妥)、普伐他汀(美百樂鎮(zhèn))對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1及TIMP-1的影響,以求闡明他汀類藥物減少冠脈事件的機(jī)制。
方法：取雄性4—6月齡SD大鼠腹腔灌洗液,收集腹腔巨噬細(xì)胞,加入培養(yǎng)液中培養(yǎng)3天,然后在培養(yǎng)有大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)基中先加入10ng/ml的IL-1β,促進(jìn)MMP-1的分泌,24小時(shí)后加入不同濃度的阿托伐他汀、普伐他汀(1×10-4 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-7 mmol/L),繼續(xù)孵育24小時(shí)后,采用ELISA法測(cè)培養(yǎng)上清液中的MMP-1及TIMP-1的濃度;另外,取10-5mmol/L濃度的阿托伐他汀加入培養(yǎng)有大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)基中,分別在6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)測(cè)培養(yǎng)上清液中的MMP-1的濃度。
結(jié)果：隨著藥物濃度的增加(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L),阿拖伐他汀對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1的抑制作用逐漸增強(qiáng)(加藥組MMP-1分泌較對(duì)照組分別減少<WP=5>17.36%、19.40%、26.54%、33.70%),與對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,而不同濃度(1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L)的普伐他汀雖使大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1略有降低,與對(duì)照組比較分別減少2.55%、2.20%、2.54%、2.04%,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,且各組間也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;兩組他汀使大鼠腹腔巨噬細(xì)胞TIMP-1的分泌均略有降低(阿托伐他汀給藥濃度分別為1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,與對(duì)照組比較使TIMP-1的分泌分別減少4.12%、3.60%、4.12%、2.06%,普伐他汀給藥濃度分別為1×10-7 mmol/L、1×10-6 mmol/L、1×10-5 mmol/L、1×10-4 mmol/L,與對(duì)照組比較使TIMP-1的分泌分別減少4.12%、4.12%、3.82%、2.57%。)但與對(duì)照組比較,均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;隨著藥物作用時(shí)間的延長(zhǎng)(6小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)),阿托伐他汀(1×10-5 mmol/L)對(duì)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1的抑制作用逐漸增強(qiáng)(加藥組MMP-1分泌較對(duì)照組分別減少11.96%、26.54%、32.77%),與對(duì)照組有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論：阿托伐他汀(立普托)呈時(shí)間劑量依賴性抑制白介素-1β介導(dǎo)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1,進(jìn)而抑制纖維帽中膠原的分解,穩(wěn)定斑塊,而阿托伐他汀對(duì)TIMP-1的分泌影響不顯著;普伐他汀(美百樂鎮(zhèn))對(duì)白介素-1β介導(dǎo)的大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌MMP-1、TIMP-1的分泌影響均不顯著,且與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
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