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ACCC 11091副地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)方法!
小楊 / 2023-10-17 09:36:14


地衣芽孢桿菌(學(xué)名:Bacillus licheniformis)是一種在土壤中常見的革蘭氏陽(yáng)性嗜熱細(xì)菌。該細(xì)菌可調(diào)整菌群失調(diào)達(dá)到治療目的,可促使機(jī)體產(chǎn)生抗菌活性物質(zhì)、殺滅致病菌。能產(chǎn)生抗活性物質(zhì),并具有獨(dú)特的生物奪氧作用機(jī)制,能抑制致病菌的生長(zhǎng)繁殖。

一、菌種簡(jiǎn)介
平臺(tái)編號(hào):Bio-52501
規(guī)格:甘油/培養(yǎng)物
拉丁屬名:Bacillus Paralicheniformis
中文名稱:副地衣芽孢桿菌
拉丁名稱:Bacillus paralicheniformis
來源歷史:<--ACCC
收藏時(shí)間:2020-09-16 00:00:00.0
原始編號(hào):50
原產(chǎn)國(guó):中國(guó)
模式菌株:是
主要用途:產(chǎn)桿菌肽
生物安全級(jí)別:一級(jí)
其它保藏中心編號(hào):ACCC 11091=IFFI 10181=ATCC 11946=CECT 621=NCTC 11946
培養(yǎng)基編號(hào):2
培養(yǎng)溫度:30℃
培養(yǎng)時(shí)間:24-48h
需氧類型:好氧
分離基物:**
采集地:**
保存方法:冷凍干燥管保藏
用途:產(chǎn)桿菌肽
注意事項(xiàng):僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用(產(chǎn)品信息以出庫(kù)為準(zhǔn))

二、培養(yǎng)基
*營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(NA)
*胰蛋白胨大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)
*LB 培養(yǎng)基(以上三款培養(yǎng)基任選中一款)

三、保藏條件
斜面菌種和安瓿瓶?jī)龈删N應(yīng)在 2-8°C 保存。西林瓶請(qǐng)置于-20°C 保存。甘油管請(qǐng)置于-80°C 保存;請(qǐng)勿長(zhǎng)期置于室溫。 

四、注意事項(xiàng)
1)凍干首次活化,干粉要全部用完,不能預(yù)留,用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液(即以上建議的培養(yǎng)基配方,不加瓊脂)或者無菌水,滴入凍干管中,輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液,接種在培養(yǎng)基上(建議不超過 2 支斜面或平板;或直接接種液體培養(yǎng)基,以不超過 5ml 為宜);
2)經(jīng)過冷凍干燥保藏,菌種處于休眠狀態(tài),復(fù)蘇培養(yǎng)時(shí)可能會(huì)延遲生長(zhǎng),這時(shí)需較長(zhǎng)的培養(yǎng)時(shí)間; 若您收到的是已復(fù)蘇的培養(yǎng)物(非凍干菌),則可以直接用于您的實(shí)驗(yàn),或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng);如有不明白之處,請(qǐng)務(wù)必先咨詢我單位技術(shù)人員,避免不必要的損失;二次接種量要多,固體斜面培養(yǎng)基水分要少才能讓菌體長(zhǎng)得比較明顯,液體培養(yǎng)要靜止培養(yǎng);
3)微生物菌種應(yīng)保藏于低溫、清潔干燥的地方,室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致菌種衰退;
4)菌種操作應(yīng)在無菌條件下進(jìn)行;轉(zhuǎn)種完畢,應(yīng)經(jīng)滅菌再做丟棄處理;
5)應(yīng)根據(jù)菌種狀況及時(shí)轉(zhuǎn)接,凍干菌種保藏時(shí)間通常為 2-25 年;
6)菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降,應(yīng)及時(shí)和微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系;
7)如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請(qǐng)?jiān)谑盏胶?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理;
8)打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行,生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作,打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部,保護(hù)眼睛;
9)安瓿瓶開封:用浸過 75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量(2-3滴)無菌水至加熱頂端使之破裂,用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍,并保持在火焰旁操作;
10)甘油管使用:使用本甘油菌時(shí)可以不用完全融解,在甘油菌表面蘸取少量涂板或進(jìn)行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用,但隨著凍融次數(shù)的增加,細(xì)菌的活力會(huì)逐漸下降;
11)西林瓶開封:用 75%酒精棉擦拭西林瓶外部,在安全柜內(nèi)使用尖嘴鉗去除塑料蓋及鋁蓋, 注意不要同時(shí)打開膠塞。緩慢開啟膠塞,用 75%酒精棉消毒瓶口部分,使用無菌吸管注入 0.5ml 適宜的液體培養(yǎng)基復(fù)溶凍干粉末。

五、凍干管打管說明書
1、安瓿瓶開封:用浸過 75%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管,用火焰加熱其頂端,滴少量(2-3滴)無菌水至加熱頂端使之破裂(應(yīng)避免過多水蒸氣影響菌種的復(fù)蘇),用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。
2、用無菌吸管吸取 0.3ml(建議勿超過 0.5ml)適宜的液體培養(yǎng)基(不添加瓊脂),滴入管內(nèi),輕輕振蕩,待安瓿管內(nèi)的菌體溶解呈懸浮狀,將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻,可將殘留在吸管中的 1-2 滴菌懸液轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上。將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng),以液體培養(yǎng)結(jié)果為準(zhǔn)。
3、凍干管打開后需一次用完,不能留存。另外,安瓿管內(nèi)大部分是用牛奶做保護(hù)劑,里面菌體為少數(shù),復(fù)蘇時(shí)要全部菌懸液接在新鮮培養(yǎng)基上,否則可能造成復(fù)蘇不成功。
4、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應(yīng)的防護(hù)設(shè)備中進(jìn)行,生物危害程度為三類的菌種應(yīng)在生物安全柜中操作,打管時(shí)凍干管應(yīng)遠(yuǎn)離面部,保護(hù)眼睛。
5、打管操作應(yīng)在燒杯或托盤上方進(jìn)行,用完凍干管應(yīng)滅菌處理后丟棄。
6、菌種復(fù)蘇時(shí),請(qǐng)務(wù)必記錄好菌種的編號(hào)和制備批號(hào),如若有菌種復(fù)蘇不活或者污染等情況,請(qǐng)?jiān)谑盏胶?2 個(gè)月內(nèi)聯(lián)系,逾期不予受理。

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