人胚胎干細胞HESCs的用途與培養(yǎng)及注意事項！
小楊 / 2024-01-09 09:24:21
人胚胎干細胞（human embryonic stem cell，hES）是一種源于人囊胚內(nèi)細胞團，經(jīng)體外分離、培養(yǎng)獲得的原始多能干細胞。
一、細胞簡介
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：HESCs
產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2
細胞數(shù)量：1x10^6：1x10^6
保存溫度：37℃：-198℃
運輸方式：常溫保溫運輸；干冰運輸
安全等級：1
用途限制：僅供科研1類
培養(yǎng)體系：干細胞專用培養(yǎng)基
培養(yǎng)溫度：37℃
二氧化碳濃度：5%
注釋：倍增時間39h
用途：細胞系
注意事項：僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、細胞用途
人胚胎干細胞的分離和體外培養(yǎng)成功具有極其重要的研究和臨床應(yīng)用價值，其可用于體外研究人類胚胎發(fā)生發(fā)育的過程，有助于理解分化發(fā)育的機制、認識生命和疾病的現(xiàn)象。通過對人胚胎干細胞體外分化和定向分化的研究，將其用來修復(fù)或替換喪失功能的組織和定向分化的研究，可識別某些靶基因，為人類新基因的發(fā)現(xiàn)及其功能的研究提供新方法。人胚胎干細胞最為深遠的潛在用途是通過定向分化誘導(dǎo)產(chǎn)生各種特化的細胞和組織，將其用來修復(fù)或替換喪失功能的組織和器官，從而治療許多疾病，如帕金森病、老年癡呆癥、脊髓損傷、腦卒中、燒傷、心臟病、糖尿病、白血病、骨關(guān)節(jié)炎等。經(jīng)過遺傳工程改造的人胚胎干細胞，還可為人類疾病的基因治療開辟更廣泛的應(yīng)用前景。在生物學(xué)特征上，人胚胎干細胞具有哺乳動物胚胎干細胞的共性，也有·一定的特性。
三、細胞接受后處理方法
1)收到細胞后，請檢查是否漏液，如果漏液，請拍照片發(fā)給我們。
2)請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)，去掉封口膜并將T25瓶置于37℃培養(yǎng)約2-3h。
3)棄去T25瓶中的培養(yǎng)基，添加 6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
4)如果細胞密度達80%-90%請及時進行細胞傳代，傳代培養(yǎng)用6ml本公司附帶的完全培養(yǎng)基。
5)接到細胞次日，請檢查細胞是否污染，若發(fā)現(xiàn)污染或疑似污染，請及時與我們?nèi)〉寐?lián)系。
四、細胞培養(yǎng)操作
1）復(fù)蘇細胞：將含有 1mL 細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 4mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)?細胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細胞 1-2 次。
2.加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。
下面 T25 瓶為類；
1、細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細胞變圓脫落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2、4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細胞，根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細胞懸液，注意凍存管做好標識。
3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
五、驗收細胞注意事項
1、收到細胞后，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯(lián)系。
2、收到細胞后，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。
3、收到細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。
4、收到細胞后如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。
特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。
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