非典型韋榮菌的菌株培養(yǎng)與實驗內容及保存方法！
小楊 / 2024-01-09 09:41:37
一、菌種簡介
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Veillonella Atypica
拉丁名稱：Veillonella atypica
來源歷史：ATCC
收藏時間：2021-01-13 00:00:00.0
原始編號：ATCC 17744
原產國：美國
模式菌株：是
生物安全級別：一級
培養(yǎng)基編號： 207
培養(yǎng)溫度：37℃
培養(yǎng)時間：24-48
需氧類型：專性厭氧
保存方法：冷凍干燥管保藏
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產品信息以出庫為準）
保藏條件：安瓿瓶凍干菌種和培養(yǎng)物應在 2-8°C 保存?；罨玫木N要放厭氧環(huán)境下保存。
二、培養(yǎng)基
培養(yǎng)基一：強化梭菌培養(yǎng)基 RCM+1.5%(60%乳酸鈉)
培養(yǎng)基二：培養(yǎng)基:1053# +1.5%(60%乳酸鈉)
胰蛋白胨 10g 牛肉膏 10g 葡萄糖 5g
氯化鈉 5g 酵母膏 3g 乙酸鈉 3g
可溶性淀粉 1g L-半胱氨酸鹽酸鹽 0.5g 瓊脂 15g
PH 6.8
三、實驗內容
1、稱量→溶化→調pH→過濾→分裝→加塞→包扎→滅菌→無菌檢查
2、干熱滅菌:裝入待滅菌物品→升溫→恒溫→降溫→開箱取物
3、高壓蒸汽滅菌:加水→裝物品→加蓋→加熱→排冷空氣→加壓→恒壓→降壓回零→排汽→取物→無菌檢查
4、過濾除菌:組裝滅菌→連接→壓濾→無菌檢查→清洗滅菌
四、保存方法
1、傳代保存法：培養(yǎng)基的濃度不宜過高,營養(yǎng)成分不宜過于豐富,尤其是碳水化合物的濃度應在可能的范圍內盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產酸菌種,則應在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。
2、液體石蠟覆蓋保存法：該法較前一種方法保存菌種的時間更長,適用于霉菌、酵母菌、放線菌及需氧細菌等的保存。
3、懸液保存法：
（1）蒸餾水保存法：適用于霉菌、酵母菌及絕大部分放線菌,將其菌體懸浮于蒸餾水中即可在室溫下保存數年。本法應注意避免水分的蒸發(fā)。
（2）糖液保存法：適用于酵母菌,如將其菌體懸浮于10%的蔗糖溶液中,然后于冷暗處保存,可長達10年。除此之外,也可使用緩沖液或食鹽水等進行保存。
4、載體保存法：土壤保存法;砂土保存法;硅膠保存法;磁珠保存法;麩皮保存法;紙片(濾紙)保存法。
五、注意事項
1）凍干首次活化，干粉要全部用完，不能預留，用無菌吸管吸取 0.3ml-0.5ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支平板，操作完畢后盡快置于厭氧環(huán)境下恒溫培養(yǎng)；若需接種液體培養(yǎng)基，制作培養(yǎng)液時，應使用厭氧螺口試管，并利用高純氮氣去除試管和培養(yǎng)液中的氧氣）；
2）經過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據需要轉接培養(yǎng)如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉種完畢，應經滅菌再做丟棄處理；
5）應根據菌種狀況及時轉接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現雜菌污染或菌種生產性能下降，應及時和
微生物菌種查詢網聯系。
7）如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到后 2 個月內聯系，逾期不予受理；
8）打管操作需由專業(yè)微生物技術人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
9）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
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