小鼠腦周細胞永生化細胞的使用方法與注意事項！
小楊 / 2024-01-29 11:33:32
一、產(chǎn)品信息
規(guī)格：1×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
細胞信息：永生化細胞
細胞來源：原代ICR小鼠腦微血管周細胞
用途：研究
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
二、細胞簡介
雖然原代
小鼠腦微血管周細胞最更能真實地反映腦微血管周細胞在小鼠體內(nèi)的生理狀態(tài)，但是一方面原代分離培養(yǎng)小鼠腦微血管周細胞周期長及對技術人員經(jīng)驗要求較高，另一方面此原代細胞在體外的生長增殖能力非常緩慢有限，以至于此細胞不能多次傳代，這些不利因素制約了原代小鼠腦微血管周細胞在實驗室的廣泛應用。欣潤生物的研究團隊擁有多年原代細胞分離培養(yǎng)及細胞永生化服務研究經(jīng)驗，成功建立了永生化小鼠腦微血管周細胞。
周細胞是一種包圍全身毛細血管和靜脈中內(nèi)皮細胞的細胞，可以收縮。周細胞嵌入毛細血管內(nèi)皮細胞的基膜中，通過物理接觸和旁分泌信號與內(nèi)皮細胞進行細胞通訊，監(jiān)視和穩(wěn)定內(nèi)皮細胞的成熟過程。在大腦中周細胞幫助維持血腦屏障，周細胞是大腦神經(jīng)血管單位的重要組成部分。此外，周細胞還具有調(diào)控毛細血管血流量、細胞碎屑清除和吞噬以及血腦屏障滲透性的作用。
本公司生產(chǎn)的永生化ICR小鼠腦微血管周細胞采用酶解法和SV40T慢病毒制備而來，細胞總量約為1×106/T25方瓶，細胞純度可達90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
三、培養(yǎng)基信息
我們推薦使用欣潤生物研制的永生化ICR小鼠腦微血管周細胞完全培養(yǎng)基（DMEM/F12+10%FBS+1%雙抗）作為體外培養(yǎng)永生化ICR小鼠腦微血管周細胞的培養(yǎng)基。
四、使用方法
1、您收到細胞后，請按照以下方法進行操作：取出 T25 方瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置 2-3 小時，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后打開瓶子回收瓶子中培養(yǎng)液作為后續(xù)培養(yǎng)此細胞的完全培養(yǎng)液（備注：先使用瓶子中完全培養(yǎng)液培養(yǎng)及盡快凍存保種細胞，保存種子后再嘗試自己完全培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察是否適合此細胞生長，以免使用自己培養(yǎng)液不適合細胞生長造成細胞狀態(tài)不好或死亡），最后按照后面細胞傳代步驟進行細胞傳代培養(yǎng)。
2、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1200rpm/min，離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 12ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2 細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
4）待細胞完全貼壁后，觀察培養(yǎng)結果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。
3、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 90%面積時，棄 T25 方瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞 3 次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 2ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后輕輕吹打細胞使之脫落，再加入完全培養(yǎng)液終止消化，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1200rpm/min，離心 5min；
3）用適當量的凍存液（完全培養(yǎng)液：FBS：DMSO=7:2:1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期儲存（或者按照梯度程序降溫模式直接放置-80 度凍存后并轉移液氮中長期儲存）。
4、細胞復蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細胞轉移至含 5ml 完全培養(yǎng)液無菌離心管中，1200rpm 離心5min，然后加入 5ml 完全培養(yǎng)液混勻細胞，將細胞懸液轉移至 T25 培養(yǎng)瓶中，放置于 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
3）第二天，換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
五、注意事項
1、培養(yǎng)基于 4℃條件下可保存 3-6 個月；
2、在細胞培養(yǎng)過程中，請注意保持無菌操作；
3、該細胞只可用于科研；
北京百歐博偉生物技術有限公司的
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