MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞的性質(zhì)與用途及生產(chǎn)工藝！
小楊 / 2024-02-04 10:09:36
一、背景
MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系是一種來源于人類乳腺癌的細(xì)胞系，具有高度的增殖能力和侵襲性。它是由MDA-MB-231細(xì)胞株經(jīng)過連續(xù)傳代培養(yǎng)而得到的亞克隆細(xì)胞系，具有與原株相似的形態(tài)學(xué)和生物學(xué)特性。
MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系在乳腺癌研究中具有重要的應(yīng)用價(jià)值，因?yàn)樗梢阅M人類乳腺癌的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過程，為研究乳腺癌的發(fā)生機(jī)制、診斷和治療提供了重要的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀４送?，MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系系還可以用于篩選抗腫瘤藥物、評(píng)估藥物療效和毒副作用等研究。
1)復(fù)蘇MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
三、應(yīng)用
采用人乳腺癌細(xì)胞系，探討了CADPE的抗乳腺癌作用及其相關(guān)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)CADPE可以抑制乳腺癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)凋亡，并有望成為有效的生長(zhǎng)因子拮抗劑。
方法：
（一）乳腺癌細(xì)胞增殖人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7、MCF-7ADR、MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系體外培養(yǎng)，同時(shí)添加CADPE處理細(xì)胞，采用單細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒檢測(cè)乳腺癌細(xì)胞增殖情況。
（二）乳腺癌細(xì)胞凋亡檢測(cè)Hoechst33342染色法、流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-PE/7-AAD雙染色檢測(cè)CADPE作用于人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系的形態(tài)學(xué)變化及凋亡率。
（三）乳腺癌細(xì)胞線粒體凋亡途徑相關(guān)測(cè)定采用不同濃度CADPE作用于人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系，利用DCFH-DA（細(xì)胞活性氧檢測(cè)探針）測(cè)定細(xì)胞內(nèi)的活性氧變化，JC-1法測(cè)定線粒體膜電位改變，Western blot檢測(cè)caspase-3，Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)。
（四）生長(zhǎng)因子受體及相關(guān)酪氨酸激酶磷酸化檢測(cè)Western blot方法檢測(cè)CADPE對(duì)VEGF、EGF、PDGF、HGF刺激的人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系VEGFR、EGFR、Src及C-Met磷酸化水平的影響。
（五）Her-2、c-myc及maz蛋白表達(dá)分析Western blot方法檢測(cè)CADPE處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系后Her-2、c-myc及maz蛋白表達(dá)。
（六）裸鼠體內(nèi)荷瘤實(shí)驗(yàn)將人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞接種裸鼠皮下，待成瘤后，每周兩次腹腔注射2.5mg/kg的CAPDE，觀察CADPE對(duì)腫瘤生長(zhǎng)及裸鼠體重影響。
結(jié)果：
（一）CADPE抑制乳腺癌細(xì)胞增殖采用CADPE處理乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435、MCF-7和MCF-7ADR細(xì)胞，結(jié)果顯示CADPE10～80μmol/L的CADPE作用24h、48h和72h，均能明顯抑制乳腺癌細(xì)胞增殖。
（二）CADPE誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞凋亡采用Hoechst33342染色乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系，熒光顯微鏡下觀察CADPE處理后細(xì)胞形態(tài)變化，結(jié)果顯示存在細(xì)胞核濃縮等細(xì)胞凋亡特征。Annexin V-PE/7-AAD雙染色結(jié)果顯示20μmol/LCADPE作用48小時(shí)后細(xì)胞的凋亡率較對(duì)照組顯著增高（p<0.01）。
（三）CADPE促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞活性氧產(chǎn)生CADPE（0～80μmol/L）處理人乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231及MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系48h，結(jié)果顯示CADPE能明顯增加細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）產(chǎn)生。
（四）CADPE降低乳腺癌細(xì)胞線粒體膜電位JC-1法測(cè)定線粒體膜電位，結(jié)果顯示CADPE處理后乳腺癌細(xì)胞的線粒體膜電位明顯降低。
（五）CADPE對(duì)乳腺癌細(xì)胞Caspase-3、Bax和Bcl-2表達(dá)的影響Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示CADPE處理后乳腺癌細(xì)胞Caspase-3和Bax表達(dá)上調(diào)，而Bcl-2表達(dá)下調(diào)。
（六）CADPE抑制配體刺激的乳腺癌細(xì)胞VEGFR、EGFR及C-Met磷酸化MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系分別經(jīng)相應(yīng)配體刺激后，VEGFR、EGFR、Src、C-Met磷酸化增加，而預(yù)先使用CADPE處理組，VEGFR、EGFR和C-Met磷酸化水平相對(duì)未處理組增幅較小，但CADPE對(duì)Src磷酸化水平無明顯影響。
（七）CADPE影響乳腺癌細(xì)胞EGFR磷酸化的時(shí)間及劑量依賴性MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系經(jīng)EGF刺激后，EGFR磷酸化水平增高，這種作用隨CADPE孵育時(shí)間延長(zhǎng)或者CADPE濃度增加而降低。
（八）CADPE抑制乳腺癌細(xì)胞Her-2、c-myc及maz蛋白表達(dá)CADPE處理乳腺癌MDA-MB-231和MDA-MB-435人乳腺癌細(xì)胞系后，可以降低Her-2、c-myc及maz蛋白表達(dá)。
（九）CADPE對(duì)裸鼠體內(nèi)乳腺癌細(xì)胞瘤生長(zhǎng)的影響裸鼠接種乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞成瘤后，給予CADPE處理，第38d、42d腫瘤體積明顯小于對(duì)照組（P＝0.046,0.025），兩組瘤重差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.017），但兩組小鼠體重的變化無明顯差別。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的
微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測(cè)序、購(gòu)買等服務(wù),是中國(guó)微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！
下載附件
上一篇：農(nóng)業(yè)生產(chǎn)神器：枯草芽孢桿菌的多重應(yīng)用方法！
下一篇：紫色紅曲菌：用于釀造白酒及產(chǎn)蛋白酶和淀粉酶