米根霉的保藏條件與注意事項及打管說明！
小楊 / 2024-02-05 09:53:58
一、菌種簡介
米根霉(Rhizopus oryzae Went et Pr.Geerl.) 是中國藥和酒曲中的重要霉菌之一。在土壤、空氣及其他物質(zhì)上亦常見。菌落疏松或稠密，最初白色后變?yōu)榛液种梁诤稚?，匍匐枝爬行，無色。假根發(fā)達，指狀或根狀分枝。囊托楔形，菌絲形成厚垣孢子，接合孢子未見。發(fā)育溫度30～35℃，最適溫度37℃，41℃亦能生長。能糖化淀粉、轉(zhuǎn)化蔗糖 ，產(chǎn)生乳酸、反丁烯二酸及微量酒精。產(chǎn)L(+)乳酸能力強，達70%左右。
二、產(chǎn)品信息
規(guī)格：凍干物
拉丁屬名：Rhizopus Oryzae Went Et Prinsen-Geerligs
其他編號：M101
培養(yǎng)基編號：14
培養(yǎng)溫度：25-28℃
培養(yǎng)時間：5-7 天
用途：做甜酒。
注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用（產(chǎn)品信息以出庫為準）
三、培養(yǎng)基
綜合馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）
20%馬鈴薯汁 1L 葡萄糖 20g MgSO4.7H2O 1.5g KH2PO4 3g
Vitanib B1 (硫胺素) Trace 微量約 8mg Agar (瓊脂) 20g pH 自然
20%馬鈴薯汁配制方法：馬鈴薯洗凈去皮，取 200 克切成小塊 , 加水 1000 毫升煮沸 20 分鐘后濾去馬鈴薯塊，將濾液補足 1000ml。
四、保藏條件
安瓿瓶凍干菌種和培養(yǎng)物應在 2-8°C 保存。西林瓶菌種請置于-20℃冷凍。甘油保藏溫度為-80°C;請勿長期置于室溫。
五、注意事項
1）凍干粉首次活化，干粉要全部用完，不能預留，用無菌吸管吸取 0.3ml 的培養(yǎng)液（即以上建議的培養(yǎng)基配方，不加瓊脂）或者無菌水，滴入凍干管中，輕輕振蕩至其溶解。吸取全部菌懸液，接種在培養(yǎng)基上（建議不超過 2 支平板或者斜面，若接種液體培養(yǎng)基，則試管液體不超過 5ml 為宜）；
2）經(jīng)過冷凍干燥保藏，菌種處于休眠狀態(tài)，復蘇培養(yǎng)時可能會延遲生長，這時需較長的培養(yǎng)時間； 若您收到的是已復蘇的培養(yǎng)物（非凍干菌），則可以直接用于您的實驗，或根據(jù)需要轉(zhuǎn)接培養(yǎng)如有不明白之處，請務必先咨詢我單位技術(shù)人員，避免不必要的損失；
3）微生物菌種應保藏于低溫、清潔干燥的地方，室溫放置時間過長會導致菌種衰退；
4）菌種操作應在無菌條件下進行；轉(zhuǎn)種完畢，應經(jīng)滅菌再做丟棄處理；
5）應根據(jù)菌種狀況及時轉(zhuǎn)接，凍干菌種保藏時間通常為 2-25 年；
6）菌種使用過程中如出現(xiàn)雜菌污染或菌種生產(chǎn)性能下降或不活，請在收到后 2 個月內(nèi)和
微生物菌種查詢網(wǎng)聯(lián)系，逾期不予受理；
7） 打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
8）安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量（2-3滴）無菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端并將凍干管開口處在火焰上過一遍，并保持在火焰旁操作。
9）甘油管使用：使用本甘油菌時可以不用完全融解，在甘油菌表面蘸取少量涂板或進行液體培養(yǎng)即可。也可以完全融解后使用，但隨著凍融次數(shù)的增加，細菌的活力會逐漸下降。
六、打管說明書
1、安瓿瓶開封：用浸過 75％酒精的脫脂棉檫試凍干管表面進行消毒，將管頂端于酒精燈外焰上均勻加熱；立即滴 2-3 滴無菌水于加熱部位，使管壁破裂；再用鑷子或其他適宜工具敲下破裂處。
2、菌株恢復培養(yǎng)：用無菌吸管吸取 0.5ml 左右液體培養(yǎng)基(固體培養(yǎng)基去掉瓊脂即可)于凍干管中將凍干菌粉全部溶解。將溶解后的菌懸液轉(zhuǎn)移至盛有 4~5mL 液體培養(yǎng)基的試管中混勻，可將殘留在吸管中 1-2 滴菌懸液轉(zhuǎn)接至固體培養(yǎng)基上。將液體試管和斜面試管于推薦條件下靜置培養(yǎng)。以液體培養(yǎng)結(jié)果為準。
3、注意事項：菌種活化前，請將安瓿管保存在 2-8℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后處于休眠狀態(tài)，延遲期較長，需要轉(zhuǎn)接至 2-3 代恢復活力。
4、復蘇后的菌種在傳 1-2 代后使用。
5、暫不啟開的安瓿管應于 4℃中保藏（特殊除外）。
6、凍干管打開后需一次用完，不能留存。
7、打管操作需由專業(yè)微生物技術(shù)人員在相應的防護設備中進行，生物危害程度為三類的菌種應在生物安全柜中操作，打管時凍干管應遠離面部，保護眼睛。
8、打管操作應在燒杯或托盤上方進行，用完凍干管應滅菌處理后丟棄。
9、如若有菌種復蘇不活或者污染等情況，請在收到后 2 個月內(nèi)聯(lián)系，逾期不予受理。
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