亚日韩在线中文字幕亚洲,国产在线播放鲁啊鲁视频,张柏芝手扒性器全部图片,亚洲成无码电影在线观看

 

JHH-7人肝癌細(xì)胞系是一種人肝癌細(xì)胞系，由日本千葉醫(yī)科大學(xué)肝癌研究所建立。這種細(xì)胞系被廣泛應(yīng)用于肝癌研究，包括肝癌的發(fā)病機(jī)制、藥物治療、基因表達(dá)譜等方面的研究。

 

JHH-7細(xì)胞系具有穩(wěn)定的生長特性和形態(tài)特征，可以通過傳代培養(yǎng)不斷增殖。這種細(xì)胞系可以作為體外模型來研究肝癌的生長和轉(zhuǎn)移，也可以用于藥物篩選和基因治療等方面的研究。

 

HH-7人肝癌細(xì)胞系是一種人類肝癌細(xì)胞系，它是由人肝癌組織中分離出來的。這種細(xì)胞系在醫(yī)學(xué)研究中被廣泛使用，因?yàn)樗梢杂糜谘芯扛伟┑纳飳W(xué)特性、藥物篩選和治療等。

 

 

形態(tài)特征：JHH-7人肝癌細(xì)胞系呈多邊形或長方形，大小不一，通常有較多的突起和偽足。

 

生長特性：JHH-7人肝癌細(xì)胞系生長迅速，可以在體外培養(yǎng)條件下持續(xù)傳代。

 

耐藥性：JHH-7人肝癌細(xì)胞系對(duì)多種化療藥物具有耐藥性，這使得它成為研究肝癌耐藥性的重要工具。

 

表達(dá)譜：JHH-7人肝癌細(xì)胞系表達(dá)多種與肝癌相關(guān)的基因和蛋白質(zhì)，如AFP、CEA、CK19等。

 

應(yīng)用前景：JHH-7人肝癌細(xì)胞系在肝癌的診斷、治療和預(yù)防方面具有廣闊的應(yīng)用前景。

 

 

1)復(fù)蘇JHH-7人肝癌細(xì)胞系細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。

 

將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

 

2)JHH-7人肝癌細(xì)胞系細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

 

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

 

c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

 

d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

 

3)JHH-7人肝癌細(xì)胞系細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。

 

 

a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

 

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

 

c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

 

探究肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)中生物鐘基因PER1與脂質(zhì)代謝的關(guān)系、綜合評(píng)價(jià)西黃丸抗肝癌效應(yīng)及生物鐘基因PER1對(duì)西黃丸抗肝癌效應(yīng)的影響。

 

 

1、生物鐘基因PER1與HCC脂質(zhì)代謝相關(guān)研究:通過RT-PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測課題組五種HCC細(xì)胞株(JHH-7人肝癌細(xì)胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF)中生物鐘基因PER1表達(dá)量。使用搭載PER1沉默慢病毒(shPER1#1#2#3)及搭載空載質(zhì)粒慢病毒(PER1-NC)轉(zhuǎn)染PER1表達(dá)量最高HCC細(xì)胞株,體外構(gòu)建生物鐘基因PER1沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)株。驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效率后,提取實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞mRNA,檢測AMPK、SREBP-1、ACC1、SCD1的表達(dá)情況。油紅O染色檢測細(xì)胞內(nèi)脂滴含量。CCK-8檢測PER 1沉默后HCC細(xì)胞的增殖情況。為進(jìn)一步探討PER 1調(diào)控HCC脂質(zhì)代謝的分子機(jī)制,設(shè)置空載質(zhì)粒組(NC組)、PER1沉默組(shPER1組)、shPER 1+AMPK抑制劑組(Compound C組),使用Western Blot檢測AMPK、p-AMPK、SREBP-1及其下游脂代謝關(guān)鍵酶類的蛋白表達(dá)水平。

 

2、西黃丸抗肝癌效應(yīng)研究:采用50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、4 0 0μg/mL西黃丸萃取液作用于HCC細(xì)胞(JHH-7人肝癌細(xì)胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF),CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測24h、48h、72h后450nm處OD值,并繪制細(xì)胞增殖曲線;集落實(shí)驗(yàn)檢測西黃丸對(duì)HCC細(xì)胞的集落生成率的影響;劃痕實(shí)驗(yàn)檢測西黃丸對(duì)HCC細(xì)胞的遷移率的影響;Transwell遷移及侵襲實(shí)驗(yàn)檢測西黃丸對(duì)HCC細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響;流式細(xì)胞儀和Annexin-V/PI法檢測西黃丸對(duì)HCC細(xì)胞凋亡率的影響。

 

3、生物鐘PER1影響西黃丸抗肝癌效應(yīng)研究:設(shè)置對(duì)照組、空載質(zhì)粒組(NC組)、PER1沉默組(shPER1組),400μg/mL西黃丸萃取液作用于NC組及shPER1組。CCK-8、集落實(shí)驗(yàn)檢測三組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞增殖能力;劃痕、Transwell實(shí)驗(yàn)檢測三組實(shí)驗(yàn)細(xì)胞遷移及侵襲轉(zhuǎn)移能力。

 

4、西黃丸調(diào)節(jié)生物鐘基因PER1研究:選取生物鐘基因PER1表達(dá)量最高及最低的兩株HCC細(xì)胞(JHH-7人肝癌細(xì)胞系、HuH-7、HepG2、SMMC-7721、HLF),分別使用5 0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL西黃丸萃取液進(jìn)行干預(yù)。提取實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞mRNA及蛋白后,RT-PCR及Western Blot檢測生物鐘基因PER1的表達(dá)量。

 

結(jié)果：RT-PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,HCC細(xì)胞株JHH-7人肝癌細(xì)胞系的PER1表達(dá)量最高,HLF的PER1表達(dá)量最低(P<0.0001);選取JHH-7體外構(gòu)建PER 1沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)株并驗(yàn)證其轉(zhuǎn)染效率。與NC組相比,shPER1能顯著降低PER1的mRNA及蛋白水平(P<0.0001)。利用構(gòu)建成功的PER1沉默穩(wěn)轉(zhuǎn)株進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示,沉默PER1后,AMPK的mRNA表達(dá)水平下調(diào),SREBP-1、ACC1、SCD1的mRNA表達(dá)水平上調(diào);油紅O染色結(jié)果顯示,PER1沉默后HCC細(xì)胞中脂滴含量增多(P<0.001);CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PER1沉默后,HCC細(xì)胞的增殖能力提高(P<0.05);進(jìn)一步檢測蛋白層面的表達(dá)情況,結(jié)果顯示,沉默PER 1后,AMPK蛋白水平無明顯變化,p-AMPK蛋白下調(diào),SREBP-1及其下游脂代謝關(guān)鍵蛋白ACC1、SCD1的表達(dá)上調(diào)。加入Compound C抑制AMPK磷酸化后,p-AMPK、SREBP-1、ACC1、SCD1的蛋白表達(dá)被逆轉(zhuǎn)。

 

北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司的微生物菌種查詢網(wǎng)提供微生物菌種保藏、測序、購買等服務(wù),是中國微生物菌種保藏中心的服務(wù)平臺(tái)，并且是集微生物菌種、菌種,ATCC菌種、細(xì)胞、培養(yǎng)基為一體的大型微生物查詢類網(wǎng)站，自設(shè)設(shè)備及技術(shù)的微生物菌種保藏中心！歡迎廣大客戶來詢！