CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞的特點(diǎn)與應(yīng)用及培養(yǎng)操作！
小楊 / 2024-03-20 09:02:51
一、背景
CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系是一種用于研究乳腺癌的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞模型。這種細(xì)胞系來自人乳腺癌細(xì)胞，經(jīng)過一定的培養(yǎng)條件，可以在實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)和繁殖。
CAMA-1細(xì)胞系的形態(tài)為上皮細(xì)胞樣，具有貼壁生長的特性。這些細(xì)胞可以用于研究乳腺癌的生物學(xué)特性、藥物篩選和腫瘤治療等方面的實(shí)驗(yàn)。通過觀察細(xì)胞的生長、增殖和凋亡等生物學(xué)行為，可以深入了解乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移機(jī)制，為乳腺癌的診斷和治療提供新的思路和方法。
二、該細(xì)胞系具有以下特點(diǎn)
形態(tài)特征：CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞呈多角形或長條形，大小不一，有明顯的核仁和胞質(zhì)。
生長特性：CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖能力，可以在體外持續(xù)傳代，并且可以在體內(nèi)形成腫瘤。
基因表達(dá)：CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞通常表達(dá)多種與乳腺癌相關(guān)的基因，如ER、PR、HER2等。
CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系在生物學(xué)研究中具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值，例如用于研究乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制、篩選抗腫瘤藥物、評估治療效果等。同時(shí)，由于乳腺癌是女性常見的惡性腫瘤之一，因此CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系也被廣泛應(yīng)用于乳腺癌的研究中。
1)復(fù)蘇CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。
將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去消化液，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
c、按6-8 mL/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心4 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。
d、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3)CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25瓶為例；
a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
四、應(yīng)用
從ATCC公司篩選所有攜帶雙微體的腫瘤細(xì)胞系，進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，并在第3代、8代、13代時(shí)獲取細(xì)胞。利用染色體核型分析技術(shù)檢測雙微體的數(shù)目及分布情況及粗略的細(xì)胞遺傳學(xué)特征，發(fā)現(xiàn)不同腫瘤細(xì)胞系所攜帶雙微體的數(shù)目及分布相差極大。繼而通過arrayCGH獲得擴(kuò)增的基因，并明確其斷裂點(diǎn)，采用相應(yīng)的DNA探針，利用熒光原位雜交確認(rèn)基因擴(kuò)增并進(jìn)一步確認(rèn)染色體的來源及明確擴(kuò)增的形式。
發(fā)現(xiàn)在10個(gè)細(xì)胞系中，血液腫瘤占10%（HL-60細(xì)胞系），MC-IXC細(xì)胞系，COLO-320DM細(xì)胞系，SW480細(xì)胞系及HL-60細(xì)胞系中由于MYC擴(kuò)增基因所致，雙微體廣泛存在，但其擴(kuò)增區(qū)域的斷裂點(diǎn)不同，其中前2個(gè)細(xì)胞系MYC雙微體與MYC均質(zhì)染色區(qū)共存，后2個(gè)細(xì)胞系僅存在MYC雙微體。SW1783細(xì)胞系、5637細(xì)胞系、CAMA-1人乳腺癌細(xì)胞系的擴(kuò)增區(qū)域分別包含PDGFRA基因、RAF1基因及SOX4基因、MYEOV基因及CCND1基因，均以均質(zhì)染色區(qū)的形式存在。T84細(xì)胞系、SNU-1細(xì)胞系及NCI-N87細(xì)胞系僅在部分細(xì)胞中見少量雙微體，arrayCGH未見明顯擴(kuò)增的區(qū)域，未行擴(kuò)增基因FISH檢測。
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