微生物菌種的代碼與復(fù)蘇及保藏方法與注意事項！
小楊 / 2024-04-15 08:51:25
一、菌種代碼的意義
國內(nèi)常見微生物檢驗所用的菌種代號是：
CMCC（F）或 CMCC（B）
CMCC —— 中國醫(yī)學(xué)菌種保藏中心
B —— 代表細菌
F ——代表真菌
乙型副傷寒沙門桿菌：CMCC (B) 50094；
二、菌種的復(fù)蘇
按照菌種的使用說明將復(fù)蘇液在超凈工作臺或生物安全柜內(nèi)進行復(fù)蘇。
三、常用菌種保藏方法
1、瓊脂斜面低溫保存法
（1）方法：將經(jīng)常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養(yǎng)基）上，按規(guī)定的溫度和時間培養(yǎng)，待充分生長后，把培養(yǎng)好的新鮮菌種用牛皮紙包好，為減緩培養(yǎng)基的水分蒸發(fā)，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月傳代一次。若用半固體高層培養(yǎng)基穿刺培養(yǎng)，一般可保藏半年至一年。
（2）適用范圍：細菌、酵母菌、霉菌保藏。
（3）特點：優(yōu)點是簡便，易于推廣；一般不需要另選擇保藏用培養(yǎng)基；對大多數(shù)微生物都適用；缺點是保藏期太短；傳代次數(shù)多，易發(fā)生變異及污染。
（4）注意事項：
a.保藏的菌種應(yīng)是生命活力旺盛的新鮮培養(yǎng)物，至少應(yīng)是第三代的培養(yǎng)物。
b.保藏時，破傷風(fēng)桿菌可用庖肉培養(yǎng)基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、濕度以及菌種管的棉塞是否松動或生霉，如有異常應(yīng)及時處理。
c.每次移植后，應(yīng)與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養(yǎng)基特征和純度無誤后再繼續(xù)保藏。
d.保藏菌種的培養(yǎng)基應(yīng)無糖，其他菌類含糖小于 2 %為宜，以免產(chǎn)酸過多，影響菌種存活。
e.銅綠假單胞菌在冰箱中易發(fā)生菌體自溶而死亡，不宜用本法保存。
2、液體石蠟保存法
（1）方法：將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養(yǎng)基中，培養(yǎng)好備用。取化學(xué)純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內(nèi)除去液體石蠟中的水分。
將上述液體石蠟加入培養(yǎng)好的菌種試管內(nèi)，液體石蠟液面以高出培養(yǎng)基最上端1cm為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。
（2）適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。
（3）特點：本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。
（4）注意事項：
a.保藏時，用新鮮培養(yǎng)物接種，應(yīng)檢查純度和特征后，方可進行保藏。
b.使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一邊，再用接種針挑取培養(yǎng)物接種到新鮮斜面上培養(yǎng)，待長出新培養(yǎng)物后，再移種一次到新斜面上即可使用。
c.將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染.
d.液體石蠟在菌種管中高出培養(yǎng)基的高度要嚴(yán)格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1cm為宜。
e.制備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養(yǎng)基中易造成污染。
3、磁珠保存法
將菌液浸入素?zé)胖?或多孔玻璃珠)后再進行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠(或無水CaSO4)，上鋪玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，經(jīng)干熱滅菌后，接入菌懸液，最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。
本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達兩年半時間。
磁珠保存時間更長，使用方便，大大減輕操作人員的工作。
四、常用菌種保藏方法
方法一：斜面?zhèn)鞔?/strong>
冰箱取出的菌種斜面，應(yīng)在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入超凈工作臺或生物安全柜。
點燃酒精燈（滅菌器），用左手握住菌種斜面，將管口靠進火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環(huán)燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉(zhuǎn)燒灼，右手用無名指、小指及掌部夾住試管塞，撥開試管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮去少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁。
堵上試管塞，左手將菌種管放下，取營養(yǎng)瓊脂斜面1支，照上述操作打開試管塞，將接種環(huán)伸入管內(nèi)至瓊脂斜面的低部，由底向上，將接種環(huán)輕貼斜面的表面曲折移動，使細菌劃在斜面的表面上。
取出接種棒，在火焰旁將試管塞堵上，然后將接種棒在火焰上燒灼滅菌。
將已接種完的斜面置35~37℃培養(yǎng)22~24小時，霉菌管一般置20~25℃霉菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)7日。取出后放人冰箱保存，一般 3個月轉(zhuǎn)種一次。
方法二：斜面-營養(yǎng)肉湯-分離平板-斜面
用接種環(huán)取上述斜面菌苔少許接種置營養(yǎng)肉湯中(5ml/支，已滅菌)，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時后，再用接種環(huán)取培養(yǎng)好的營養(yǎng)肉湯菌懸液，接種于分離平板，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時，用接種針選典型菌落劃線于營養(yǎng)瓊脂斜面，置35~37℃培養(yǎng)18~24小時。一般同時接種幾支管，其中一支用于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養(yǎng)基中，其它用做工作菌種。
常用分離平板：
五、菌種保管
菌種保管應(yīng)有專人負責(zé)，雙人雙鎖，確保菌種安全。
菌種領(lǐng)用、傳代、保存都要有記錄，包括名稱、入庫、領(lǐng)用、傳代日期、鑒定者、主要鑒定性能及滅活或銷毀情況。
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