環(huán)境中無菌或殺菌效果檢查方法的質(zhì)量控制與重要原則！
小楊 / 2025-07-03 10:03:49
百歐博偉生物：檢查環(huán)境中的無菌或殺菌效果是微生物學(xué)、醫(yī)療、制藥、食品生產(chǎn)和實驗室安全等領(lǐng)域的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。這涉及到一系列標準化的測試和監(jiān)測方法，旨在驗證消毒或滅菌程序的有效性，并持續(xù)監(jiān)控環(huán)境的微生物控制水平。主要檢查方法可分為以下幾類：
一、微生物學(xué)方法（金標準 - 直接檢測活微生物）
培養(yǎng)基接觸法 (Contact Plates / Replicate Organism Detection and Counting - RODAC Plates):
原理：使用填充了特定培養(yǎng)基（如胰蛋白酶大豆瓊脂TSA）的平皿，直接按壓在待測表面（工作臺面、設(shè)備表面、墻壁、手套等）。
應(yīng)用：主要用于平坦、規(guī)則表面的微生物監(jiān)測。
優(yōu)點：操作相對簡單，能定量（菌落形成單位 CFU/plate）。
缺點：不適用于不規(guī)則或彎曲表面；可能殘留培養(yǎng)基在表面上。
棉拭子/拭子涂抹法 (Swab Testing):
原理：用無菌棉拭子或海綿棒在無菌稀釋液中潤濕，然后在規(guī)定面積（常使用模板）的待測表面上來回涂抹采樣。將拭子放入稀釋液中震蕩洗脫，然后取洗脫液接種到固體培養(yǎng)基上或進行膜過濾。
應(yīng)用：適用于各種表面，尤其是不規(guī)則、彎曲或難以接觸的區(qū)域。
優(yōu)點：適用范圍廣。
缺點：操作步驟稍多，可能引入人為誤差（采樣力度、面積控制），回收率可能不如接觸碟法穩(wěn)定。
沉降碟法/空氣暴露法 (Settle Plates):
原理：將裝有固體培養(yǎng)基的平皿打開蓋子，暴露在待測空氣中一定時間（通常30-60分鐘），讓空氣中的微生物自然沉降到培養(yǎng)基表面。然后蓋上蓋子進行培養(yǎng)。
應(yīng)用：主要用于監(jiān)測空氣中的沉降菌。常用于潔凈室、無菌操作臺等環(huán)境的靜態(tài)或動態(tài)監(jiān)測。
優(yōu)點：操作簡單，成本低，反映特定位置、特定時間點的沉降菌污染。
缺點：只能捕獲沉降下來的較大粒子，不能代表小粒徑的浮游菌；結(jié)果受暴露時間、氣流、位置影響大；不能定量空氣總體微生物負荷。
浮游菌采樣法 (Active Air Sampling):
原理：使用空氣采樣器（如撞擊式采樣器、離心式采樣器、液體沖擊式采樣器）主動抽取一定體積的空氣，通過物理方式（撞擊、離心、沖擊）將空氣中的微生物粒子捕獲到固體培養(yǎng)基表面或液體培養(yǎng)基中，然后進行培養(yǎng)計數(shù)。
應(yīng)用：定量監(jiān)測空氣中浮游菌濃度（CFU/m³）。是潔凈室等關(guān)鍵環(huán)境空氣微生物監(jiān)測的主要方法。
優(yōu)點：可定量，結(jié)果更準確反映空氣微生物負荷，采樣效率相對較高。
缺點：設(shè)備成本較高，需要校準和維護。
生物指示劑 (Biological Indicators - BIs):
原理：將已知數(shù)量、高度耐藥的標準微生物孢子（如濕熱滅菌用
嗜熱脂肪地芽孢桿菌孢子，環(huán)氧乙烷/干熱滅菌用
枯草桿菌黑色變種孢子）制成載體（紙條、小片、懸液、自含式安瓿）。將BI放置在滅菌設(shè)備最難滅菌的位置（如滅菌柜排水口、大包裹中心、管道死角等），隨同物品一起經(jīng)歷滅菌程序。滅菌后，在嚴格控制的條件下培養(yǎng)BI，檢查孢子是否被殺滅。
應(yīng)用：用于驗證滅菌過程（如高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌器、環(huán)氧乙烷滅菌器）的有效性，證明無菌保證水平達到要求（通常SAL=10??）。
優(yōu)點：直接挑戰(zhàn)滅菌過程，使用標準化的高抗性微生物，提供過程有效性的最強有力證據(jù)。
缺點：主要用于滅菌過程驗證，不是日常環(huán)境監(jiān)測；需要較長的培養(yǎng)時間（通常24-72小時甚至7天）；成本較高。
二、物理化學(xué)方法（間接指示或快速檢測）
化學(xué)指示劑 (Chemical Indicators - CIs):
原理：利用對滅菌關(guān)鍵參數(shù)（溫度、時間、蒸汽飽和度、氣體濃度、輻照劑量等）敏感的化學(xué)物質(zhì)（染料、油墨），在達到預(yù)定參數(shù)時發(fā)生不可逆的顏色變化或形態(tài)變化。
類型：有1-6類（根據(jù)ISO 11140標準），從最簡單的過程指示膠帶（1類）到復(fù)雜的多參數(shù)指示物（5類）和用于特定滅菌周期的模擬指示物（6類）。
應(yīng)用：快速、即時地判斷某個物品是否經(jīng)過了滅菌過程，以及過程參數(shù)是否大致符合要求。常用于包裹外部（膠帶）和內(nèi)部（卡片、標簽）。
優(yōu)點：即時結(jié)果，成本低，使用方便。
缺點：不能證明微生物被殺滅，只能指示物理化學(xué)參數(shù)是否達到。不能替代生物指示劑或微生物監(jiān)測。
物理參數(shù)監(jiān)測：
原理：使用傳感器（溫度探頭、壓力傳感器、氣體濃度監(jiān)測儀、計時器、輻照劑量計等）連續(xù)記錄滅菌過程的關(guān)鍵參數(shù)（溫度、壓力、時間、濕度、氣體濃度、劑量）。
應(yīng)用：是所有滅菌設(shè)備運行控制和記錄的基礎(chǔ)。通過驗證確認設(shè)備參數(shù)設(shè)置能確保滅菌效果后，日常運行主要依靠監(jiān)控這些物理參數(shù)在合格范圍內(nèi)。
優(yōu)點：實時監(jiān)控，數(shù)據(jù)可記錄追溯。
缺點：設(shè)備本身需要定期校準和維護；傳感器放置位置需代表“最冷點”；參數(shù)合格不等于微生物一定被殺滅（需結(jié)合BI驗證）。
ATP 生物熒光檢測法 (Adenosine Triphosphate Bioluminescence):
原理：所有活細胞（微生物、動植物細胞殘留）都含有ATP。試劑中的熒光素酶在Mg²?存在下，催化熒光素與ATP反應(yīng)，產(chǎn)生與ATP含量成正比的光信號。儀器讀取相對光單位。
應(yīng)用：快速（幾秒到幾分鐘）評估表面的清潔度（主要反映有機物殘留，包括微生物）。常用于醫(yī)院環(huán)境、食品加工設(shè)備的清潔驗證。
優(yōu)點：非?？焖?，操作簡便，結(jié)果直觀。
缺點：不能區(qū)分微生物和非微生物來源的ATP，也不能區(qū)分死菌活菌。結(jié)果需結(jié)合清潔標準和微生物學(xué)方法解讀。靈敏度不如培養(yǎng)法。
如何選擇和使用這些方法？
明確目的：
驗證滅菌過程有效性？ → 首選 生物指示劑 (BI) + 物理參數(shù)監(jiān)測 + 化學(xué)指示劑 (CI - 5/6類)。
日常監(jiān)測潔凈室/無菌操作區(qū)空氣？ → 浮游菌采樣法 + 沉降碟法。
監(jiān)測表面清潔度/消毒效果？ → 接觸碟法 / 棉拭子法 (微生物學(xué)) 或 ATP檢測 (快速篩查清潔度)。
快速判斷物品是否經(jīng)過滅菌過程？ → 化學(xué)指示膠帶/標簽 (CI - 1/3/4類)。
快速評估一般環(huán)境表面清潔度？ → ATP檢測。
遵循標準和規(guī)范：不同行業(yè)有具體的環(huán)境監(jiān)測和滅菌驗證標準，必須嚴格遵守。
制定監(jiān)測計劃 (Monitoring Plan):
確定監(jiān)測點：選擇具有代表性的位置，特別是關(guān)鍵控制點、高風(fēng)險區(qū)域、最難清潔/滅菌的位置（“最差情況”點）。
確定監(jiān)測頻率：根據(jù)環(huán)境風(fēng)險等級、歷史數(shù)據(jù)、法規(guī)要求確定（如每次滅菌、每日、每周、每月）。
選擇合適的方法：根據(jù)監(jiān)測目的和點位特點選擇。
設(shè)定合格標準：依據(jù)法規(guī)、指南和內(nèi)部風(fēng)險評估設(shè)定微生物限度。
規(guī)定操作程序 (SOP): 詳細描述采樣方法、使用的培養(yǎng)基/試劑、培養(yǎng)條件、讀數(shù)方法、結(jié)果記錄和報告流程。
規(guī)定行動限和警戒限：超出警戒限需關(guān)注調(diào)查，超出行動限需立即采取糾正措施。
質(zhì)量控制：
培養(yǎng)基適用性檢查：確保培養(yǎng)基能支持微生物生長。
采樣設(shè)備校準：如空氣采樣器的流量校準。
人員培訓(xùn)：確保操作人員熟練掌握無菌采樣技術(shù)。
陰性/陽性對照：確保檢測過程的有效性。
數(shù)據(jù)記錄與趨勢分析：記錄所有結(jié)果，定期分析趨勢，及時發(fā)現(xiàn)潛在問題。
重要原則
無菌是相對的：“無菌”通常指微生物存活的概率極低，而非絕對的零。檢查是為了證明達到并維持這種極低概率的狀態(tài)。
過程控制是關(guān)鍵：檢查（尤其是微生物學(xué)方法）是驗證和監(jiān)控手段，但保證無菌/殺菌效果的根本在于設(shè)計良好的程序、合格的設(shè)備、嚴格的流程控制、充分的人員培訓(xùn)和良好的操作規(guī)范。
綜合運用：沒有任何單一方法是萬能的。通常需要結(jié)合微生物學(xué)方法（直接檢測活菌）和物理化學(xué)方法來全面評估。
基于風(fēng)險：監(jiān)測的嚴格程度和方法選擇應(yīng)基于該環(huán)境或過程對產(chǎn)品/患者安全的風(fēng)險評估。
總之，檢查環(huán)境的無菌或殺菌效果是一個系統(tǒng)性的工作，需要根據(jù)具體應(yīng)用場景、法規(guī)要求和科學(xué)原理，選擇合適的組合方法，制定并嚴格執(zhí)行完善的監(jiān)測計劃和質(zhì)量控制程序。微生物學(xué)方法（尤其是培養(yǎng)法）是確認有無活微生物存在的金標準，而物理化學(xué)方法和快速檢測則主要用于過程監(jiān)控、快速篩查和輔助判斷。
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