我們要如何控制游離生物素測定培養(yǎng)基配制的操作環(huán)境？
小楊 / 2025-08-09 09:31:43
百歐博偉生物：控制游離生物素測定培養(yǎng)基的配制環(huán)境是確保培養(yǎng)基純度、避免外源生物素污染（干擾測定結(jié)果）和雜菌污染的關(guān)鍵。由于生物素在環(huán)境中廣泛存在（如空氣塵埃、皮膚分泌物、水質(zhì)殘留等），操作環(huán)境需嚴(yán)格控制，具體措施如下：
一、核心環(huán)境要求：潔凈與低生物素殘留
游離生物素測定依賴指示菌的生長量與生物素濃度的線性關(guān)系，若環(huán)境中存在微量外源生物素，會直接導(dǎo)致測定值偏高。因此，操作環(huán)境需滿足：
潔凈級別：至少達(dá)到10000 級潔凈室（局部 100 級，如超凈工作臺），減少空氣中的塵埃顆粒（可能攜帶生物素或雜菌）。
生物素低殘留：避免環(huán)境表面、器具、試劑被含生物素的物質(zhì)（如雞蛋、牛奶、化妝品、維生素制劑等）污染。
二、操作空間的控制
1、專用實驗區(qū)域劃分
設(shè)置獨立的培養(yǎng)基配制室，與微生物培養(yǎng)室、樣品處理室分開，避免交叉污染。
室內(nèi)禁止存放含生物素的試劑或物品（如復(fù)合維生素、動物血清、乳制品樣品等），張貼“禁止帶入生物素相關(guān)物質(zhì)”標(biāo)識。
2、空氣凈化與流通
安裝高效空氣過濾器（HEPA），確保空氣經(jīng)過濾后進入操作區(qū)，換氣次數(shù)≥15 次 / 小時，維持室內(nèi)正壓（防止外界未過濾空氣滲入）。
配制操作需在垂直流超凈工作臺內(nèi)進行（優(yōu)于水平流，避免操作者呼出氣體污染），工作臺需定期（每 3 個月）檢測風(fēng)速和潔凈度，過濾器失效后及時更換。
操作前 30 分鐘開啟工作臺的風(fēng)機和紫外燈（254nm 波長），對臺面和空氣進行消毒（紫外可破壞生物素的分子結(jié)構(gòu)，輔助降低殘留）。
三、環(huán)境表面的清潔與去污染
1、臺面與設(shè)備的處理
操作臺表面、實驗臺、冷藏柜等，每日用0.1% 稀鹽酸溶液擦拭（生物素易溶于酸性溶液，鹽酸可有效去除表面殘留的生物素），再用蒸餾水擦拭 2 次（避免鹽酸殘留影響培養(yǎng)基 pH）。
禁止用含生物素的清潔劑（如某些含維生素的天然清潔劑），推薦使用中性洗滌劑先去除油污，再按上述步驟去生物素。
2、地面與墻面的維護
地面每日用1% 過氧乙酸溶液拖地（過氧乙酸兼具殺菌和分解生物素的作用），墻角、縫隙需重點清潔，避免塵埃堆積。
墻面、門窗每周用蒸餾水擦拭，減少表面附著物。
四、人員操作的環(huán)境控制
1、個人防護與清潔
操作人員需穿專用潔凈服（長袖、連體式，覆蓋頭發(fā)和鞋子），戴一次性無菌手套（避免皮膚分泌的生物素污染），手套每小時更換 1 次，或接觸非無菌區(qū)域后立即更換。
操作前用75% 酒精對手套和手臂進行消毒，避免使用含保濕成分（可能含生物素）的護手霜。
禁止在操作區(qū)內(nèi)飲食、交談（避免唾液飛沫中的生物素或微生物污染），必要時戴防護面罩。
2、操作行為規(guī)范
所有操作在超凈工作臺的無菌操作區(qū)中央進行（遠(yuǎn)離出風(fēng)口和邊緣，避免氣流擾動導(dǎo)致污染）。
打開試劑瓶或容器時，瓶口需對著工作臺的出風(fēng)口，避免手或身體遮擋氣流。
分裝培養(yǎng)基時，避免溶液濺出（若濺出需立即用稀鹽酸擦拭清潔，再用蒸餾水沖洗）。
五、水與氣體的控制
1、實驗用水的純度
培養(yǎng)基配制需使用超純水（18.2 MΩ?cm），且儲水容器需專用（避免與其他實驗用水混用），每周用稀鹽酸浸泡容器 1 次，去除內(nèi)壁可能吸附的生物素。
2、氣體來源的凈化
若使用氮氣或壓縮空氣輔助操作（如吹干玻璃器皿），氣體需經(jīng)0.22 μm 濾膜過濾，去除其中的微生物和塵埃顆粒。
六、環(huán)境監(jiān)測與維護
定期檢測生物素殘留：每月用“生物素檢測試紙”或空白培養(yǎng)基（不含生物素）接種指示菌，若指示菌生長，說明環(huán)境存在生物素污染，需徹底清潔并排查污染源。
微生物污染監(jiān)測：每周在操作臺面和空氣中放置“沉降菌培養(yǎng)皿”（37℃培養(yǎng) 48 小時），菌落數(shù)需≤1 CFU / 皿（100 級環(huán)境標(biāo)準(zhǔn)）。
設(shè)備維護記錄：建立超凈工作臺、空氣過濾器、滅菌鍋的維護日志，記錄清潔、更換、校準(zhǔn)時間，確保設(shè)備處于正常運行狀態(tài)。
通過以上措施，可從空間、空氣、表面、人員、物料等多維度控制操作環(huán)境，最大限度減少外源生物素和雜菌的干擾，保證游離生物素測定培養(yǎng)基的質(zhì)量和測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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