微生物實驗組織培養(yǎng)中的常見問題與可能原因及解決策略！
小楊 / 2025-11-10 10:00:29
百歐博偉生物：組織培養(yǎng)（簡稱“組培”）是一項精細且技術要求高的工作，過程中會遇到各種各樣的問題。這些問題可以大致歸為以下幾類：污染問題、褐化問題、玻璃化問題、生長異常問題以及其他操作相關的問題。
下面我將詳細列出這些常見問題、可能原因及解決策略。
一、污染問題
這是組培中最常見、最令人頭疼的問題，指培養(yǎng)物被微生物（細菌、真菌）侵染。
1、現(xiàn)象：
細菌污染：培養(yǎng)物周圍出現(xiàn)黏液狀、光滑的菌落或渾濁的暈圈。
真菌污染：出現(xiàn)白色、黑色、綠色等絨毛狀或粉末狀的菌落。
2、主要原因：
外植體消毒不徹底：植物材料本身攜帶大量微生物，消毒劑濃度、時間或方法不當。
操作過程不規(guī)范：超凈工作臺操作不熟練，如工具灼燒不徹底、手部越過敞開的瓶口、說話、咳嗽等。
培養(yǎng)基或器具滅菌不徹底：高壓蒸汽滅菌鍋溫度、壓力或時間不足。
培養(yǎng)環(huán)境不潔：接種室環(huán)境差，超凈工作臺過濾器失效，培養(yǎng)瓶密封不嚴。
3、解決策略：
優(yōu)化消毒程序：選擇適宜的消毒劑，調整濃度和處理時間。對于難消毒的材料，可先對母株進行預處理或取內(nèi)生菌較少的部位。
嚴格無菌操作：強化操作訓練，所有工具徹底灼燒冷卻，操作動作要輕、快、準。
確保滅菌效果：定期檢查滅菌鍋性能，嚴格遵守滅菌規(guī)程。
添加抗生素：在培養(yǎng)基中添加適量抗生素可抑制細菌生長，但需注意其對植物生長的潛在影響，且不能作為常規(guī)依賴。
二、褐化問題
指外植體切口處分泌褐色物質，導致培養(yǎng)基變褐，外植體生長受阻甚至死亡。
現(xiàn)象：外植體切口處和周圍培養(yǎng)基變?yōu)楹稚蚝谏?/div>
1、主要原因：
植物種類：富含酚類物質的木本植物（如核桃、桃）、部分草本植物（如香蕉）更易褐化。
外植體損傷：切割造成機械損傷，激活酚類物質氧化。
培養(yǎng)基成分：激素（尤其是細胞分裂素）濃度過高或無機鹽濃度過高。
培養(yǎng)條件：溫度過高或光照過強。
2、解決策略：
選擇適宜的外植體和時期：選擇生長旺盛季節(jié)的幼嫩部位作為外植體。
抗氧化處理：在接種前，將外植體浸泡在抗氧化劑溶液中（如維生素C、檸檬酸）。
初始暗培養(yǎng)：接種后先進行幾天暗培養(yǎng)，抑制光催化氧化。
頻繁轉接：在褐化發(fā)生初期，及時將外植體轉移到新的培養(yǎng)基上。
調整培養(yǎng)基：降低激素和無機鹽濃度，使用液體培養(yǎng)基或添加活性炭（可吸附褐化物質）。
三、玻璃化問題
植株生長異常，呈半透明水浸狀，莖葉脆弱，組織結構畸形，生理功能不正常。
現(xiàn)象：幼苗葉片和莖腫脹、半透明，易碎，生根困難。
1、主要原因：
培養(yǎng)基成分：細胞分裂素濃度過高是主要原因；銨態(tài)氮含量過高；瓊脂濃度過低導致培養(yǎng)基水分勢過高。
培養(yǎng)環(huán)境：培養(yǎng)瓶內(nèi)濕度過高、透氣性差；溫度不適；光照不足。
2、解決策略：
降低激素濃度：尤其是降低細胞分裂素的用量。
增加瓊脂濃度：提高培養(yǎng)基硬度，降低可利用水分。
改善通氣：使用透氣性好的封口膜，或增加培養(yǎng)瓶內(nèi)空氣流通。
調整培養(yǎng)條件：適當增加光照強度和光照時間，控制適宜溫度。
調整氮源：嘗試使用硝酸鈣含量較高的培養(yǎng)基。
四、生長異常問題
1、不分化或分化率低
原因：基因型限制；外植體選擇不當（過于老化）；激素種類和比例不適宜（生長素/細胞分裂素比例失衡）；培養(yǎng)基不適用。
策略：更換外植體類型和取材時期；系統(tǒng)性地調整激素配比；嘗試不同的基本培養(yǎng)基。
2、生根困難
原因：基因型差異；苗齡過長或苗本身不健壯；生長素種類、濃度或處理時間不當；培養(yǎng)基中含有抑制生根的物質（如過高濃度的無機鹽）。
策略：將壯苗轉移到生根培養(yǎng)基（通常含低濃度生長素）；進行暗培養(yǎng)誘導；采用浸蘸法高濃度生長素速蘸后插入無激素培養(yǎng)基。
3、愈傷組織過度生長
原因：生長素濃度過高，導致外植體脫分化形成大量愈傷組織，而不進行再分化。
策略：降低生長素濃度，或調整生長素與細胞分裂素的比例，促進器官發(fā)生。
五、其他問題
1、操作相關問題：
培養(yǎng)基不凝固：瓊脂量不夠或pH值不適宜。
植物材料漂?。涸谝后w培養(yǎng)基中，材料固定不當。
培養(yǎng)物干枯：培養(yǎng)瓶密封不嚴，濕度喪失。
2、移栽成活率低：
原因：組培苗（試管苗）生理功能不完善，葉片角質層和氣孔功能差，直接從高濕、弱光、異養(yǎng)環(huán)境移栽到低濕、強光、自養(yǎng)環(huán)境，易導致萎蔫死亡。
策略：煉苗。先打開瓶蓋鍛煉數(shù)天，讓幼苗逐漸適應外界濕度；移栽時洗凈根部培養(yǎng)基，使用滅菌的基質，保持高濕度，逐漸增加光照。
六、總結與建議
組織培養(yǎng)的成功依賴于對“材料-培養(yǎng)基-環(huán)境”這個系統(tǒng)的精細調控。
系統(tǒng)性排查：遇到問題時，應從外植體選擇與消毒、培養(yǎng)基配方（激素、鹽分、支撐物）、無菌操作過程、培養(yǎng)環(huán)境（光、溫、濕）等多個環(huán)節(jié)逐一排查。
做好記錄：詳細記錄每一次實驗的操作參數(shù)和結果，這是分析和解決問題的關鍵。
保持耐心和嚴謹：組培工作需要極大的耐心和一絲不茍的嚴謹態(tài)度。很多問題需要通過反復試驗才能找到最佳解決方案。
北京百歐博偉生物技術有限公司擁有對菌種、細胞、培養(yǎng)基、配套試劑等產(chǎn)品需求者的極優(yōu)質服務，對購買項目的前期資料提供,中期合同保證,后期貨物跟蹤到最終售后的確保項目準確到位，都有相關人士進行維護,確保您在
微生物菌種查詢網(wǎng)中獲得最優(yōu)質服務！也正因為此，北京百歐博偉生物技術有限公司與國內(nèi)外多家研制單位、生物制藥、第三方檢測機構和科研院所院校、化工企業(yè)有著良好、長期和穩(wěn)定的合作關系！
下載附件
上一篇：培養(yǎng)基和無菌水制備的原理、材料、步驟及關鍵注意事項！