進(jìn)入無菌室前標(biāo)準(zhǔn)化操作指南：人員與物品凈化及環(huán)境預(yù)準(zhǔn)備
小楊 / 2025-11-17 10:16:07
百歐博偉生物：進(jìn)入無菌室前的準(zhǔn)備是確保無菌環(huán)境不被污染、實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，需遵循“人員凈化→物品凈化→環(huán)境預(yù)準(zhǔn)備”的邏輯流程，以下是詳細(xì)的標(biāo)準(zhǔn)化操作指南（適用于生物安全二級(jí)及以上無菌室，涵蓋微生物培養(yǎng)、細(xì)胞操作等場景）：
一、核心原則
單向流原則：人員、物品需從“清潔區(qū)→緩沖間→無菌操作區(qū)”單向進(jìn)入，不得逆行；
最小污染原則：禁止攜帶與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品（如手機(jī)、背包、水杯），減少非必要操作；
標(biāo)準(zhǔn)化原則：所有步驟需嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)室 SOP，定期培訓(xùn)并考核。
二、人員準(zhǔn)備（最關(guān)鍵的污染控制環(huán)節(jié)）
1、進(jìn)入前的健康與狀態(tài)檢查
禁止患有呼吸道感染、皮膚病、腹瀉等可能產(chǎn)生污染物的人員進(jìn)入；
不得佩戴首飾（戒指、手鐲、手表等，易殘留微生物）、化妝品（口紅、粉底等可能脫落）；
修剪指甲（長度≤1mm，避免劃傷手套或殘留污垢），禁止涂指甲油；
洗手前需摘除口罩、帽子，重新更換無菌款（非一次性口罩需提前滅菌）。
2、洗手與手消毒（遵循 WS/T 313-2019《醫(yī)務(wù)人員手衛(wèi)生規(guī)范》）
步驟 操作細(xì)節(jié) 注意事項(xiàng)
預(yù)沖洗 用流動(dòng)水（38℃左右）沖洗雙手至腕上 10cm，濕潤皮膚 避免用手觸碰水龍頭（建議使用感應(yīng)或腳踏式）
涂抹洗手液 取適量醫(yī)用洗手液，揉搓雙手（掌心、手背、指縫、指腹、拇指、指尖、腕部） 揉搓時(shí)間≥15 秒，確保無死角
沖洗 流動(dòng)水沖凈洗手液，避免殘留 水從指尖流向腕部，避免臟水回流
干燥 用無菌一次性擦手紙按壓干燥（不揉搓），擦手紙丟棄至專用垃圾桶 禁止用公用毛巾或工作服擦手
手消毒 取 75% 酒精噴灑雙手至濕潤，自然晾干（≥30 秒） 不可用吹風(fēng)機(jī)吹干，避免酒精揮發(fā)不完全
3、更衣流程（從外到內(nèi)，層層無菌）
第一步：脫外衣：在清潔區(qū)脫下日常衣物、鞋子，放入專用儲(chǔ)物柜（每人一格，定期消毒）；
第二步：穿無菌服：
先穿無菌褲子（褲腳需覆蓋鞋面，避免裸露）；
再穿無菌上衣（拉鏈拉至頂部，袖口收緊，避免寬松）；
戴無菌帽子（覆蓋全部頭發(fā)，包括鬢角、后腦勺，禁止頭發(fā)外露）；
戴無菌口罩（覆蓋口鼻，鼻梁條壓緊，確保無漏氣，建議使用 N95 或以上級(jí)別）；
穿無菌鞋套（覆蓋全部鞋底及褲腳，若無菌室配備無菌拖鞋，需先換拖鞋再穿鞋套）；
第三步：緩沖間二次消毒：
進(jìn)入緩沖間后，關(guān)閉第一道門，再打開第二道門（雙向門禁止同時(shí)開啟）；
用 75% 酒精噴灑全身（重點(diǎn)：袖口、領(lǐng)口、褲腳、鞋套表面），噴灑后停留≥30 秒，讓酒精自然揮發(fā)；
若緩沖間配備風(fēng)淋室，需進(jìn)入風(fēng)淋室吹淋 15-30 秒（風(fēng)淋時(shí)轉(zhuǎn)動(dòng)身體，確保全身被氣流吹掃）。
4、戴手套（無菌操作的最后一道屏障）
選擇合適尺寸的無菌手套（過大易脫落，過小易破損），優(yōu)先使用無粉手套（粉末可能污染實(shí)驗(yàn)樣品，如細(xì)胞、培養(yǎng)基）；
戴手套方法：
取出手套，檢查包裝是否完好、在有效期內(nèi)；
用已消毒的手捏住手套口內(nèi)側(cè)（無菌面），先戴一只手，再用戴手套的手捏住另一只手套口外側(cè)（非無菌面），戴入另一只手；
調(diào)整手套位置，確保覆蓋袖口，無褶皺、破損；
戴手套后，用 75% 酒精噴灑手套表面，自然晾干（禁止用手觸摸非無菌物品，如緩沖間門把手）。
三、實(shí)驗(yàn)物品準(zhǔn)備（需經(jīng)無菌處理并規(guī)范帶入）
1、物品無菌要求
所有進(jìn)入無菌室的物品（培養(yǎng)基、試劑、耗材、儀器配件等）需經(jīng)滅菌處理：
耐高溫高壓物品（如玻璃器皿、培養(yǎng)基）：121℃、103.4kPa 滅菌 20-30 分鐘；
不耐高溫物品（如酶、血清、一次性耗材）：輻照滅菌（γ 射線）或過濾滅菌（0.22μm 濾膜）；
儀器設(shè)備（如移液器、離心機(jī)）：表面用 75% 酒精擦拭消毒，必要時(shí)用紫外燈照射 30 分鐘。
檢查滅菌標(biāo)識(shí)：確認(rèn)物品包裝上的滅菌指示卡（如蒸汽滅菌指示卡變色、輻照滅菌標(biāo)識(shí)完整），且在有效期內(nèi)。
2、物品帶入流程
分類打包：將無菌物品放入無菌傳遞窗（或傳遞柜），非無菌物品禁止帶入；
傳遞窗操作：
外側(cè)人員打開傳遞窗外側(cè)門，放入物品后關(guān)閉門，啟動(dòng)紫外燈照射消毒 30 分鐘；
無菌室內(nèi)人員待紫外燈關(guān)閉后（需等待 5-10 分鐘，讓臭氧分解），打開傳遞窗內(nèi)側(cè)門，取出物品；
取出后立即關(guān)閉內(nèi)側(cè)門，避免傳遞窗內(nèi)無菌環(huán)境被污染。
擺放規(guī)范：將取出的無菌物品放在超凈工作臺(tái)內(nèi)（或指定無菌區(qū)域），避免堆疊，確保氣流流通。
四、無菌室環(huán)境預(yù)準(zhǔn)備（實(shí)驗(yàn)前 30 分鐘完成）
1、清潔與消毒
用 0.1% 苯扎氯銨溶液擦拭無菌室地面、墻面、工作臺(tái)面，作用 30 分鐘后用無菌蒸餾水擦拭干凈（避免消毒劑殘留）；
超凈工作臺(tái)清潔：
用 75% 酒精擦拭工作臺(tái)面、側(cè)壁、燈罩，從內(nèi)向外單向擦拭；
打開工作臺(tái)風(fēng)機(jī)，運(yùn)行 30 分鐘，讓氣流穩(wěn)定后再進(jìn)行操作。
2、紫外燈照射消毒
關(guān)閉無菌室門窗，開啟紫外燈（波長 254nm），照射時(shí)間≥30 分鐘（確保照射強(qiáng)度≥70μW/cm²，定期檢測紫外燈強(qiáng)度，不合格及時(shí)更換）；
照射期間禁止人員進(jìn)入（紫外線會(huì)損傷皮膚和眼睛）；
照射結(jié)束后，關(guān)閉紫外燈，開窗通風(fēng) 5-10 分鐘（排除臭氧），再進(jìn)入無菌室。
3、環(huán)境參數(shù)檢查
溫度：控制在 20-25℃，濕度 40%-60%（避免高濕度導(dǎo)致霉菌滋生）；
壓差：無菌操作區(qū)與緩沖間的壓差≥10Pa（確保氣流從無菌區(qū)流向非無菌區(qū)，防止污染）；
若配備生物安全柜，需檢查其運(yùn)行狀態(tài)（氣流速度、報(bào)警功能），確保正常工作。
五、禁忌與注意事項(xiàng)
禁止在無菌室內(nèi)飲食、飲水、吸煙、交談（避免飛沫污染）；
人員進(jìn)入后，若需暫時(shí)離開，需脫下無菌服、手套，再次進(jìn)入時(shí)需重新按流程準(zhǔn)備；
不得將無菌服、手套帶出無菌室（避免污染外部環(huán)境，同時(shí)防止外部微生物附著）；
實(shí)驗(yàn)過程中若出現(xiàn)手套破損、衣物污染，需立即更換，并對污染區(qū)域進(jìn)行消毒；
定期維護(hù)：無菌室需每周徹底清潔消毒 1 次，紫外燈每 6 個(gè)月檢測 1 次強(qiáng)度，傳遞窗、超凈工作臺(tái)定期校準(zhǔn)。
六、常見錯(cuò)誤與糾正
常見錯(cuò)誤 潛在風(fēng)險(xiǎn) 糾正措施
戴手套后觸摸非無菌物品 手套被污染，進(jìn)而污染實(shí)驗(yàn)樣品 戴手套后僅接觸無菌物品，觸摸非無菌物品后需立即更換手套
無菌服領(lǐng)口、頭發(fā)外露 頭發(fā)或衣物上的微生物掉落，污染環(huán)境 重新調(diào)整帽子和無菌服，確保頭發(fā)完全覆蓋，領(lǐng)口收緊
紫外燈照射后未通風(fēng)直接進(jìn)入 臭氧刺激呼吸道，影響健康 照射結(jié)束后通風(fēng) 5-10 分鐘，待臭氧濃度降低后再進(jìn)入
滅菌物品包裝破損仍使用 物品已被污染，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗 包裝破損的無菌物品禁止使用，立即更換
通過以上標(biāo)準(zhǔn)化準(zhǔn)備流程，可最大程度降低無菌室的污染風(fēng)險(xiǎn)，為微生物培養(yǎng)、細(xì)胞操作等實(shí)驗(yàn)提供可靠的無菌環(huán)境。實(shí)際操作中需結(jié)合實(shí)驗(yàn)室 SOP 和具體實(shí)驗(yàn)需求調(diào)整，核心是確保“人員、物品、環(huán)境”三者均達(dá)到無菌標(biāo)準(zhǔn)，且操作過程可追溯、可重復(fù)。
北京百歐博偉生物技術(shù)有限公司擁有Biolog微生物鑒定系統(tǒng)，超低溫冰箱，生物安全柜等儀器設(shè)備可進(jìn)行對微生物分離、鑒定等常規(guī)的分子實(shí)驗(yàn)研究。對我國生命科學(xué)研究、生物技術(shù)創(chuàng)新和產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需求進(jìn)行積極的面對社會(huì)乃至國外收集保藏提供微生物菌種資源。在保證生物安全和保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的前提下，為工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、衛(wèi)生健康、環(huán)境保護(hù)、科研教育提供微生物物種資源、基因資源、信息資源和專業(yè)技術(shù)服務(wù)。
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