血清學(xué)反應(yīng)在血液制品質(zhì)量控制中的要點及具體操作流程！
小楊 / 2025-12-06 10:19:10
百歐博偉生物：血清學(xué)反應(yīng)在血液制品質(zhì)量控制中主要用于檢測病原體的抗原或特異性抗體，以確保血液制品的安全性，避免傳播感染性疾病。其具體操作流程需結(jié)合檢測目標和方法，以下以最常用的酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）檢測病毒抗體/抗原為例，簡述通用操作流程：
一、檢測前準備
1、樣本處理
待檢樣本為血液制品（如血漿、純化后的蛋白制品），需按照標準操作規(guī)程（SOP）進行稀釋或預(yù)處理（如去除干擾物質(zhì)、滅活部分病毒等），確保樣本濃度符合檢測要求。
同時準備陽性對照（已知含目標抗原/抗體的樣本）、陰性對照（已知不含目標抗原/抗體的樣本）和空白對照（如稀釋液），用于結(jié)果判斷的基準。
2、試劑與器材準備
試劑：商品化 ELISA 檢測試劑盒（含包被抗原/抗體的微孔板、酶標記二抗、底物溶液、終止液、洗滌液等），需確認試劑在有效期內(nèi)，且儲存條件符合要求（如 2~8℃冷藏）。
器材：酶標儀、洗板機、移液器、離心管、恒溫箱等，需提前消毒（如紫外線照射），避免交叉污染。
二、核心檢測步驟（以間接 ELISA 檢測抗體為例）
1、包被抗原
將特異性病原體抗原按照試劑盒說明書稀釋后，加入微孔板的反應(yīng)孔中，每孔 100~200μL。
4℃孵育過夜或 37℃孵育 1~2 小時，使抗原吸附于微孔板表面。
2、洗滌
棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液（如含吐溫 - 20 的磷酸鹽緩沖液 PBS-T）洗滌 3~5 次，每次浸泡 1~2 分鐘，最后在吸水紙上拍干，去除未結(jié)合的游離抗原。
3、封閉
加入封閉液（如含牛血清白蛋白 BSA 的 PBS），每孔 200μL，37℃孵育 1~2 小時，封閉微孔板上未結(jié)合抗原的空白位點，減少非特異性結(jié)合。
再次洗滌，去除多余封閉液。
4、加樣反應(yīng)
加入待檢血液制品樣本、陽性對照、陰性對照，每孔 100μL，37℃孵育 1~2 小時，使樣本中的特異性抗體與包被抗原結(jié)合。
洗滌，去除未結(jié)合的抗體及其他雜質(zhì)。
5、加入酶標記二抗
加入酶標記的抗人 IgG 抗體，每孔 100μL，37℃孵育 1 小時，使二抗與樣本中的抗體特異性結(jié)合，形成“抗原 - 抗體 - 酶標二抗”復(fù)合物。
再次洗滌，徹底去除未結(jié)合的酶標二抗（此步驟關(guān)鍵，直接影響結(jié)果特異性）。
6、顯色反應(yīng)
加入底物溶液，每孔 100μL，37℃避光孵育 15~30 分鐘，至陽性對照顯色明顯，陰性對照無明顯顯色。
7、終止反應(yīng)
加入終止液，每孔 50μL，終止酶促反應(yīng)，此時藍色產(chǎn)物轉(zhuǎn)為黃色。
8、結(jié)果讀取
用酶標儀在特定波長下測定各孔的吸光度（OD 值），記錄數(shù)據(jù)。
三、結(jié)果判斷與標準
1、臨界值（Cut-off）計算
根據(jù)試劑盒說明書，通常以陰性對照 OD 值的均值乘以系數(shù)（如 2.1）確定臨界值。
2、結(jié)果判定
待檢樣本 OD 值≥臨界值：判定為陽性（提示血液制品中可能含有目標抗體或抗原，存在污染風(fēng)險）。
待檢樣本 OD 值 < 臨界值：判定為陰性（符合質(zhì)量要求）。
若陽性對照未顯色或陰性對照顯色異常，需重新實驗。
四、后續(xù)處理
陽性樣本需重復(fù)檢測確認，若仍為陽性，該血液制品需剔除，不得用于生產(chǎn)。
所有實驗廢液、耗材按生物安全要求處理（如高壓滅菌），避免環(huán)境污染。
五、關(guān)鍵要點
全程嚴格遵循 SOP，控制溫度、孵育時間、洗滌次數(shù)等參數(shù)，減少誤差。
不同病原體檢測方法可能不同（如檢測抗原常用雙抗體夾心法，病毒滅活效果驗證可能用中和試驗），需根據(jù)具體目標調(diào)整流程。
通過上述血清學(xué)反應(yīng)，可有效篩查血液制品中的感染性標志物，是保障其臨床應(yīng)用安全的核心環(huán)節(jié)之一。
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