沙門氏菌、志賀氏菌增菌液的使用原理與操作方法及注意事項！
小楊 / 2026-01-30 10:19:09
沙門氏菌、
志賀氏菌增菌液是微生物檢測中針對這兩類致病菌的選擇性增菌培養(yǎng)基，核心作用是在樣品中目標(biāo)菌數(shù)量少、雜菌干擾大的情況下，抑制雜菌生長，同時為
沙門氏菌、
志賀氏菌提供適宜營養(yǎng)使其快速繁殖，達(dá)到后續(xù)分離、鑒定的菌液濃度要求；二者因目標(biāo)菌生理特性差異，增菌液的配方和選擇抑制機制略有區(qū)別，且檢測中常采用分步增菌（預(yù)增菌 + 選擇性增菌）提升檢出率。
一、核心使用原理
1、通用原理
樣品（如食品、水樣、糞便、環(huán)境拭子）中目標(biāo)菌常為微量存在，且伴隨大量
大腸菌群、
葡萄球菌、
芽孢桿菌等雜菌，直接分離易因目標(biāo)菌數(shù)量不足或雜菌覆蓋而漏檢。增菌液通過營養(yǎng)適配 + 選擇性抑制的雙重設(shè)計，實現(xiàn)目標(biāo)菌的富集：
營養(yǎng)適配：添加蛋白胨、酵母膏、葡萄糖等基礎(chǔ)營養(yǎng)，匹配沙門氏菌、志賀氏菌的異養(yǎng)型代謝需求，滿足其生長繁殖的物質(zhì)和能量供應(yīng)；
選擇性抑制：添加特異性抑菌劑（如膽鹽、煌綠、亞硒酸鈉、新生霉素等），利用雜菌與目標(biāo)菌對抑菌劑的耐受度差異，抑制非目標(biāo)菌生長（
沙門氏菌、
志賀氏菌對這類抑菌劑具有天然耐受性）。
2、沙門氏菌增菌液（常用 SC、TTB 增菌液）
SC 增菌液：含亞硒酸鈉（核心抑菌劑）+ 膽鹽，亞硒酸鈉能強烈抑制革蘭氏陽性菌和部分革蘭氏陰性雜菌（如
大腸埃希氏菌），對沙門氏菌無抑制；葡萄糖含量低，避免因產(chǎn)酸過多抑制沙門氏菌，適合沙門氏菌的快速富集，是實驗室常規(guī)使用的增菌液；
TTB 增菌液：含煌綠+ 膽鹽，煌綠的抑菌作用更強，適合雜菌含量極高的樣品（如肉類、糞便），但煌綠濃度對沙門氏菌有輕微影響，需嚴(yán)格控制培養(yǎng)條件，常與 SC 增菌液搭配使用。
3、志賀氏菌增菌液（常用 GN 增菌液）
志賀氏菌無鞭毛、生長速度慢，且對營養(yǎng)和環(huán)境的要求更苛刻，GN 增菌液（革蘭氏陰性菌增菌液） 為其專用增菌液，設(shè)計上兼顧“弱抑菌 + 慢生長適配”：
抑菌劑為膽鹽（低濃度）+ 枸櫞酸鈉 + 磷酸氫二鉀，僅輕度抑制革蘭氏陽性菌和部分大腸菌群，避免強抑菌劑抑制志賀氏菌（志賀氏菌對煌綠、亞硒酸鈉等強抑菌劑耐受性差）；
緩沖體系（枸櫞酸鈉 + 磷酸鹽）穩(wěn)定培養(yǎng)基 pH 在 7.0~7.4，防止志賀氏菌生長過程中產(chǎn)酸導(dǎo)致 pH 下降而抑制自身，同時低葡萄糖含量減少代謝產(chǎn)酸，適配其慢生長特性。
二、常用增菌液類型及適用場景
目標(biāo)菌 增菌液類型 核心抑菌劑 適用場景
沙門氏菌 SC 增菌液 亞硒酸鈉 + 膽鹽 常規(guī)樣品（食品、水樣），雜菌含量中等
沙門氏菌 TTB 增菌液 煌綠 + 膽鹽 雜菌含量極高的樣品（糞便、肉類糜）
志賀氏菌 GN 增菌液 低濃度膽鹽 + 枸櫞酸鈉 + 磷酸鹽 所有志賀氏菌檢測樣品，唯一專用選擇性增菌液
關(guān)鍵注意：志賀氏菌無專用強選擇性增菌液，不可用沙門氏菌的 SC/TTB 增菌液替代（強抑菌劑會直接殺死志賀氏菌）；
沙門氏菌可單獨用 SC 或 TTB，也可雙增菌液平行使用提升檢出率。
三、標(biāo)準(zhǔn)操作方法（實驗室微生物檢測通用，符合 GB 4789 系列標(biāo)準(zhǔn)）
（一）前置準(zhǔn)備
樣品前處理：根據(jù)樣品類型制樣，如固體食品（25g 樣品 + 225mL 無菌生理鹽水/緩沖蛋白胨水）制成 1:10 勻漿，液體樣品直接取 25mL+225mL 稀釋液，糞便樣品取 1g+9mL 無菌生理鹽水制成懸液；
預(yù)增菌（可選但推薦）：若樣品中目標(biāo)菌可能處于損傷狀態(tài)（如食品加工中的高溫、低溫、防腐劑處理），先將上述稀釋液接種至緩沖蛋白胨水（BPW），36±1℃培養(yǎng) 8~12h，修復(fù)損傷菌的細(xì)胞膜，使其恢復(fù)生長能力，再轉(zhuǎn)種至選擇性增菌液（志賀氏菌檢測預(yù)增菌可省略，直接接種 GN 增菌液）；
增菌液滅菌：增菌液需 121℃高壓蒸汽滅菌 15min，冷卻至室溫后使用（煌綠、新生霉素等熱敏性抑菌劑需滅菌后冷卻至 50℃左右無菌添加）；
無菌操作：全程在超凈工作臺進(jìn)行，避免雜菌污染。
（二）選擇性增菌操作（核心步驟）
取1mL 預(yù)增菌液（BPW 培養(yǎng)物） 接種至 10mL SC 增菌液，同時另取 1mL 預(yù)增菌液接種至 10mL TTB 增菌液（雙增菌平行操作）；
密封試管（松蓋，保證通氣），36±1℃培養(yǎng) 18~24h；
培養(yǎng)后觀察菌液狀態(tài)：渾濁生長為正常（目標(biāo)菌富集），無菌生長需重新檢測（樣品無目標(biāo)菌或操作污染）。
取1mL 樣品稀釋液/勻漿 直接接種至 10mL GN 增菌液（無需預(yù)增菌，預(yù)增菌會導(dǎo)致雜菌過度生長掩蓋志賀氏菌）；
36±1℃培養(yǎng) 6~8h（關(guān)鍵：不可培養(yǎng) 24h，志賀氏菌生長慢，培養(yǎng)過久雜菌會大量繁殖抑制其生長）；
培養(yǎng)后取菌液上層（志賀氏菌為兼性厭氧菌，上層氧氣充足更易生長）用于后續(xù)分離。
（三）后續(xù)應(yīng)用
增菌培養(yǎng)完成后，取 1~2 環(huán)增菌液，分別劃線接種至對應(yīng)的選擇性分離培養(yǎng)基：
沙門氏菌：SS 瓊脂、麥康凱瓊脂、木糖賴氨酸脫氧膽鹽瓊脂（XLD），36±1℃培養(yǎng) 18~24h，挑取可疑菌落鑒定；
志賀氏菌：SS 瓊脂、麥康凱瓊脂、HE 瓊脂，36±1℃培養(yǎng) 18~24h，挑取無色半透明可疑菌落鑒定。
四、關(guān)鍵注意事項（質(zhì)量控制核心，避免漏檢/假陽性）
抑菌劑濃度控制：煌綠、亞硒酸鈉濃度過高會抑制沙門氏菌，過低則雜菌泛濫，需嚴(yán)格按配方稱量，且熱敏性抑菌劑無菌添加；
培養(yǎng)時間嚴(yán)格把控：志賀氏菌 GN 增菌液最多培養(yǎng) 8h，超過則雜菌（如
大腸埃希氏菌）快速生長，與志賀氏菌競爭營養(yǎng)和空間；沙門氏菌培養(yǎng) 18~24h，不足則目標(biāo)菌富集不夠，過長則可能因代謝產(chǎn)物積累抑制自身；
增菌液 pH 校準(zhǔn)：滅菌前需將增菌液 pH 調(diào)至 7.0~7.4（
沙門氏菌）/7.2~7.4（
志賀氏菌），pH 偏酸會直接抑制目標(biāo)菌生長，可通過 1mol/L HCl/NaOH 調(diào)節(jié)；
陰性/陽性對照：每次實驗需設(shè)置對照，確保增菌液有效性：
陰性對照：無菌生理鹽水接種至增菌液，培養(yǎng)后應(yīng)無菌生長，排除增菌液本身污染；
樣品稀釋比例：嚴(yán)格按 1:10 接種（1mL 樣品/預(yù)增菌液 + 10mL 增菌液），樣品過多會導(dǎo)致雜菌濃度過高，突破抑菌劑作用，樣品過少則目標(biāo)菌富集不足；
不可交叉使用增菌液：志賀氏菌禁用 SC/TTB 增菌液，沙門氏菌不可用 GN 增菌液（抑菌作用弱，雜菌過多）；
損傷菌修復(fù)：食品加工樣品、冷藏樣品需先做 BPW 預(yù)增菌，否則損傷的沙門氏菌無法在選擇性增菌液中生長，導(dǎo)致漏檢。
五、常見問題及解決辦法
增菌液無菌生長：①樣品無目標(biāo)菌；②預(yù)增菌時間不足，損傷菌未修復(fù)；③抑菌劑濃度過高，殺死目標(biāo)菌；→ 排查：重做陽性對照，確認(rèn)增菌液有效性，延長預(yù)增菌時間至 12h；
志賀氏菌增菌后分離無可疑菌落：①培養(yǎng)時間超過 8h，雜菌過度生長；②樣品稀釋比例不當(dāng)；→ 排查：嚴(yán)格控制 GN 增菌液培養(yǎng) 6~8h，重新按 1:10 接種；
沙門氏菌增菌液雜菌過多：①膽鹽/亞硒酸鈉/煌綠濃度過低；②樣品雜菌含量極高，未用 TTB 強抑菌增菌液；→ 排查：重新配制增菌液，提高抑菌劑濃度，改用 TTB 增菌液；
增菌液渾濁但分離無目標(biāo)菌：①增菌液被雜菌污染；②目標(biāo)菌未生長，渾濁為雜菌生長；→ 排查：重做陰性對照，確認(rèn)增菌液無菌，更換樣品前處理方法。
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