部分國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定使用陽(yáng)性和陰性菌株作為對(duì)照菌株,除此之外實(shí)驗(yàn)室對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制與驗(yàn)收都會(huì)用到商品化的標(biāo)準(zhǔn)菌株。目前國(guó)產(chǎn)商品化的標(biāo)準(zhǔn)菌株主要以干粉形式銷(xiāo)售,將標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行有效的活化和保藏對(duì)于實(shí)驗(yàn)室來(lái)說(shuō)是非常重要的,下面分別介紹菌種活化保藏方法及相應(yīng)培養(yǎng)基。
一、菌種活化(ATCC菌株請(qǐng)按說(shuō)明書(shū)附錄“推薦培養(yǎng)基”使用)
1、菌種活化方法:
用無(wú)菌吸管吸取0.3-0.4ml適宜液體培養(yǎng)基,滴入菌種管內(nèi),輕輕震蕩,使凍干菌體溶解成懸浮液體。取0.2ml上述菌懸液轉(zhuǎn)鐘于特定的瓊脂培養(yǎng)基斜面或平板上,剩余的菌液注入3-4ml特定的液體培養(yǎng)基,再按照菌種特性,置于適宜條件下培養(yǎng)。
2、菌種活化常用液體培養(yǎng)基
?。?)普通細(xì)菌:
營(yíng)養(yǎng)肉湯NB胰蛋白胨大豆肉湯TSB腦心浸液培養(yǎng)基BHI胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯TSB-YE
(2)真菌:真菌培養(yǎng)基
?。?)乳酸菌:MRS肉湯
?。?)嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSB
3、菌種活化常用固體培養(yǎng)基
(1)普通細(xì)菌:
營(yíng)養(yǎng)瓊脂NA胰蛋白胨大豆瓊脂TSA腦心浸液瓊脂BHIA胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂TSA-YE
?。?)真菌:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基
(3)乳酸菌:MRS瓊脂MRSA
?。?)嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSA
二、菌種保藏
目前主要采用超低溫保藏法作為菌株的長(zhǎng)期保藏,斜面培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)室傳代保藏方法。
1、-80℃低溫保藏法
將微生物菌種保藏在-80℃冰箱的一種保藏方法。原理是低溫條件可減緩微生物的新陳代謝,以達(dá)到長(zhǎng)期有效地保藏微生物。
操作方法:
1、將培養(yǎng)好的菌種制成高濃度的菌懸液(108~1010CFU/mL)。
2、取滅菌甘油與菌懸液充分混勻,使其甘油終濃度約為20%。
3、混勻后分裝入冷凍試管或安瓿中,于-60℃~-80℃超低溫冰箱中保藏。
2、傳代培養(yǎng)保藏法——包括斜面培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)等。
操作方法:
即將菌種穿刺到斜面或半固體中,培養(yǎng)好后放在低溫干燥處保存(2~5℃冰箱),定期移植,一般1~2個(gè)月移植一次(視菌種特征而定)。
使用培養(yǎng)基:
細(xì)菌:營(yíng)養(yǎng)瓊脂;
真菌:PDA;
乳酸菌:MRS培養(yǎng)基;
厭氧菌:庖肉培養(yǎng)基;
嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSA或營(yíng)養(yǎng)瓊脂
保藏時(shí)間依微生物的種類(lèi)而定:霉菌、放線菌及芽孢菌保存2~4個(gè)月傳代一次,酵母菌間隔兩個(gè)月,普通細(xì)菌一個(gè)月,假單胞菌兩周傳代一次。