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常見菌種活化及保藏方法
中國微生物菌種查詢網(wǎng) / 2017-06-27 09:49:26

  部分國家檢測標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定使用陽性和陰性菌株作為對照菌株,除此之外實(shí)驗(yàn)室對培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì)量控制與驗(yàn)收都會用到商品化的標(biāo)準(zhǔn)菌株。目前國產(chǎn)商品化的標(biāo)準(zhǔn)菌株主要以干粉形式銷售,將標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行有效的活化和保藏對于實(shí)驗(yàn)室來說是非常重要的,下面分別介紹菌種活化保藏方法及相應(yīng)培養(yǎng)基。

  一、菌種活化(ATCC菌株請按說明書附錄“推薦培養(yǎng)基”使用)

  1、菌種活化方法:

  用無菌吸管吸取0.3-0.4ml適宜液體培養(yǎng)基,滴入菌種管內(nèi),輕輕震蕩,使凍干菌體溶解成懸浮液體。取0.2ml上述菌懸液轉(zhuǎn)鐘于特定的瓊脂培養(yǎng)基斜面或平板上,剩余的菌液注入3-4ml特定的液體培養(yǎng)基,再按照菌種特性,置于適宜條件下培養(yǎng)。

  2、菌種活化常用液體培養(yǎng)基

 ?。?)普通細(xì)菌:

  營養(yǎng)肉湯NB胰蛋白胨大豆肉湯TSB腦心浸液培養(yǎng)基BHI胰酪胨大豆酵母浸膏肉湯TSB-YE

 ?。?)真菌:真菌培養(yǎng)基

  (3)乳酸菌:MRS肉湯

 ?。?)嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSB

  3、菌種活化常用固體培養(yǎng)基

 ?。?)普通細(xì)菌:

  營養(yǎng)瓊脂NA胰蛋白胨大豆瓊脂TSA腦心浸液瓊脂BHIA胰酪胨大豆酵母浸膏瓊脂TSA-YE

 ?。?)真菌:馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基

  (3)乳酸菌:MRS瓊脂MRSA

  (4)嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSA

  二、菌種保藏

  目前主要采用超低溫保藏法作為菌株的長期保藏,斜面培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)作為實(shí)驗(yàn)室傳代保藏方法。

  1、-80℃低溫保藏法

  將微生物菌種保藏在-80℃冰箱的一種保藏方法。原理是低溫條件可減緩微生物的新陳代謝,以達(dá)到長期有效地保藏微生物。

  操作方法:

  1、將培養(yǎng)好的菌種制成高濃度的菌懸液(108~1010CFU/mL)。

  2、取滅菌甘油與菌懸液充分混勻,使其甘油終濃度約為20%。

  3、混勻后分裝入冷凍試管或安瓿中,于-60℃~-80℃超低溫冰箱中保藏。

  2、傳代培養(yǎng)保藏法——包括斜面培養(yǎng)和半固體培養(yǎng)等。

  操作方法:

  即將菌種穿刺到斜面或半固體中,培養(yǎng)好后放在低溫干燥處保存(2~5℃冰箱),定期移植,一般1~2個(gè)月移植一次(視菌種特征而定)。

  使用培養(yǎng)基:

  細(xì)菌:營養(yǎng)瓊脂;

  真菌:PDA;

  乳酸菌:MRS培養(yǎng)基;

  厭氧菌:庖肉培養(yǎng)基;

  嗜鹽性弧菌:含3%NaCl的TSA或營養(yǎng)瓊脂

  保藏時(shí)間依微生物的種類而定:霉菌、放線菌及芽孢菌保存2~4個(gè)月傳代一次,酵母菌間隔兩個(gè)月,普通細(xì)菌一個(gè)月,假單胞菌兩周傳代一次。


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