楊晟研究組題為“CRISPR-Cpf1assistedgenomeeditingofCorynebacteriumglutamicum”的研究成果,發(fā)現(xiàn)新兇手弗蘭西斯菌來(lái)源的Cas效應(yīng)蛋白(FnCpf1)與谷氨酸棒桿菌適配,而SpCas9則表現(xiàn)出對(duì)谷氨酸棒桿菌的毒性,并建立了高效的谷氨酸棒桿菌CRISPR-Cpf1基因組編輯系統(tǒng)。
CRISPR-Cas是當(dāng)前最強(qiáng)有力的基因組編輯技術(shù)。基于化膿鏈球菌來(lái)源的Cas效應(yīng)蛋白(SpCas9)最初被開(kāi)發(fā)為人類細(xì)胞的基因組編輯工具,隨后被適配到各個(gè)物種細(xì)胞中,被認(rèn)為是“戰(zhàn)無(wú)不勝攻無(wú)不克”的Cas效應(yīng)蛋白。但在谷氨酸棒桿菌這一最重要的氨基酸生產(chǎn)菌株中,SpCas9卻難以適配應(yīng)用。
楊晟研究組開(kāi)發(fā)的這套CRISPR-Cpf1基因組編輯方法,結(jié)合單鏈重組系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了基因組精細(xì)修改,最高效率達(dá)到100%;亦可實(shí)現(xiàn)大片段缺失和插入,將原先每輪一周的基因組編輯操作縮短到3天。以L-脯氨酸合成代謝關(guān)鍵酶γ-谷氨酰激酶的149位甘氨酸為例,應(yīng)用CRISPR-Cpf1基因組編輯系統(tǒng)對(duì)其實(shí)施原位飽和點(diǎn)突變,可成功篩選獲得抗L-脯氨酸反饋抑制的高產(chǎn)菌株。
該研究工作得到了國(guó)家973項(xiàng)目、上海市優(yōu)秀學(xué)科帶頭人計(jì)劃資助。中科院植物生理生態(tài)研究所蔣宇博士為第一作者,中科院上海有機(jī)化學(xué)研究所王任小研究組協(xié)助進(jìn)行了γ-谷氨酰激酶的分子模建。