中國(guó)微生物菌種查詢網(wǎng)支原體對(duì)細(xì)胞的影響,可以從兩方面考慮。一方面是對(duì)細(xì)胞的直接影響,細(xì)胞被支原體污染后,增殖緩慢,部分細(xì)胞變圓,從瓶壁上脫落,部分細(xì)胞雖然表面變化不十分明顯,實(shí)際上潛伏著多方面的危險(xiǎn)。另一方面,支原體可以通過(guò)消耗培養(yǎng)基中的精氨酸,抑制細(xì)胞DNA、RNA的合成,降低細(xì)胞的抵抗力。因此,支原體污染對(duì)細(xì)胞的影響是非常廣泛和深遠(yuǎn)的。造成細(xì)胞污染的支原體有很多,但主要有四種支原體:口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體和萊氏無(wú)膽甾原體。由于支原體體積很小,直徑約在0.2-2.0um之間,可以通過(guò)濾膜而直接造成培養(yǎng)基或血清的污染。另外,被支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)基液體往往并不渾濁,細(xì)胞受損程度并不明顯,形態(tài)很少改變,這樣就更增加 了人們對(duì)其的防范難度。
由于支原體種類不同,應(yīng)采取不同的方法進(jìn)行檢測(cè),常用的方法有如下幾種:
1、熒光染色法(DNA染色法):此法快捷、簡(jiǎn)便、價(jià)廉,但其靈敏度有一定欠缺,易造成漏檢,若細(xì)胞片制備不當(dāng)則結(jié)果難以判斷。
2、間接免疫熒光法和免疫印跡:簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng),如果應(yīng)用單克隆抗體試劑,效果會(huì)更好。
3、觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長(zhǎng)特征:支原體污染比較嚴(yán)重時(shí)可出現(xiàn)生長(zhǎng)減慢,有的培養(yǎng)基pH明顯變酸,并出現(xiàn)細(xì)胞病變,其病變特征與病毒感染相似,因此不能準(zhǔn)確診斷。
4、PCR法檢測(cè)支原體:最為快速、靈敏,取樣量少,既可進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)也可進(jìn)行細(xì)胞上清的檢測(cè),同時(shí)可以檢測(cè)8種支原體的污染,是目前常用的檢測(cè)手段。但其成本較高,條件要求嚴(yán)格,有時(shí)易出現(xiàn)假陽(yáng)性。
5、分離培養(yǎng)法:大多數(shù)支原體可出現(xiàn)特有的典型菌落。該方法準(zhǔn)確、可靠,但時(shí)間長(zhǎng)。 但其實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng),所以常用于進(jìn)行對(duì)懷疑細(xì)胞的最后甄別。
6、電子顯微鏡和免疫電子顯微鏡法:此法非常直觀、準(zhǔn)確,但對(duì)使用環(huán)境要求高,操作復(fù)雜,實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng),敏感性不高,常作為樣品的最后定性檢測(cè)。