中國微生物菌種查詢網(wǎng)土壤是微生物棲居的大本營，各種各樣的微生物都雜居在一起。 稀釋法常用于分離土壤、各種水域及基物表面的微生物。其原理是：先將土壤樣品進行一系列倍比稀釋，然后將幾個適當濃度的稀釋液均勻涂布于分離培養(yǎng)基表面。經(jīng)培養(yǎng)后，土壤中的單個微生物細胞或孢子即可在培養(yǎng)基表面形成肉眼可見的菌落。再將所需菌落轉(zhuǎn)入試管斜面,然后經(jīng)平板劃線再次取得單菌落后，即可得到所需菌種的純菌株。因此，本方法的最大特點是可以對土壤樣品進行活菌計數(shù)，同時，如果采用選擇性培養(yǎng)基，可以分離到目的菌株。下面是稀釋法分離具體步驟供大家參考。
材料
1．樣品：過篩（孔徑約2mm）的新鮮土壤樣品（使用前先測定含水量）。
2．培養(yǎng)基：在300ml 三角瓶中分別分裝150ml 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基、馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基和高氏1 號培養(yǎng)基。
3．選擇性培養(yǎng)基：纖維素酶產(chǎn)生菌分離培養(yǎng)基 （選做）
4．滅菌物品：250ml 三角瓶分裝90ml 無菌水（內(nèi)含20-30 粒玻璃珠），18×180mm 試管分裝9ml 無菌水，培養(yǎng)皿，1ml 吸管，玻璃刮鏟。
方法
1．制備土壤稀釋液：用小天平稱分別稱取少時潮濕的菜園土和風干的菜園土各10g，置于90ml 含玻璃珠的無菌水中，震蕩10min，靜置30 秒后，即得土壤原液（10－1）。再用1ml 無菌吸管吸取1ml 上清液加到9ml 無菌水中，充分搖勻，即得（10－2）稀釋液。依次類推，潮濕土制得10－1 至10－6 稀釋液； 風干土制備10－1 至10－4 稀釋液；
2．分離：
（1）細菌的分離（基內(nèi)接種）
a.．取9 個無菌平皿，用1ml 無菌吸管分別吸取0.1ml 10－4、10－5 及10－6 潮濕土的土壤稀釋液，接入平皿，每一稀釋度設3 個重復，
b．將已融化并冷卻至45℃左右的細菌培養(yǎng)基倒入無菌培養(yǎng)皿中，每皿約15ml，共9 個平皿，與菌液充分混勻，凝固后，在平皿上作好培養(yǎng)基種類、稀釋度、組號及日期標記；
c．將平板倒置，37℃培養(yǎng)2~3 天后觀察并計數(shù)。
（2）放線菌的分離（表面接種）
a．將已融化的150ml 高氏一號培養(yǎng)基中加入2 滴10%重鉻酸鉀溶液，充分混勻后倒入無菌培養(yǎng)皿中，每皿約15ml，共9 個平皿，凝固后，在平皿上作好培養(yǎng)基種類、稀釋度、組號及日期標記；
b．用1ml 無菌吸管分別取0.1ml 10－3、10－4 及10－5 風干土的土壤稀釋液，接入培養(yǎng)基表面，每一稀釋度3 個重復；
c．用無菌玻璃刮鏟，按稀釋度由高到低順序依次輕輕涂布，不要刮破培養(yǎng)基表面；
d．將平板倒置，37℃培養(yǎng)5~7 天后觀察并計數(shù)。
（3）真菌的分離（表面接種）
a．將已融化的150ml PDA 培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，加入0.3ml 鏈霉素溶液（1000?/ml），充分混勻后倒入無菌培養(yǎng)皿中，每皿約15ml，共9 個平皿，凝固后，在平皿上作好培養(yǎng)基種類、稀釋度、組號及日期標記；
b．用1ml 無菌吸管分別取0.1ml 10－3、10－4 及10－5 潮濕土的土壤稀釋液，接入培養(yǎng)基表面，每一稀釋度3 個重復；
c．用無菌玻璃刮鏟按稀釋度由高到低順序依次輕輕涂布，不要刮破培養(yǎng)基表面；
d．將平板倒置，26℃~28℃培養(yǎng)3 天后觀察并計數(shù)。