中國微生物菌種查詢網(wǎng)取1 ml細(xì)胞培養(yǎng)液或0.2ml細(xì)胞懸浮液，接種于液體培養(yǎng)基中，置于37℃培養(yǎng)二周，觀察是否有混濁或是pH值改變之情形。培養(yǎng)一周及二周后，分別取0.1 ml液體培養(yǎng)液涂在agar plate上，將其倒放置于37℃厭氧箱培養(yǎng)，培養(yǎng)至少3星期，持續(xù)觀察是否有支原體之菌落出現(xiàn)。 另取1 ml細(xì)胞培養(yǎng)液或0.2ml細(xì)胞懸浮液，涂抹在agar plate上，37℃厭氧培養(yǎng)3星期，持續(xù)觀察是否支原體菌落出現(xiàn)。 另作正負(fù)反應(yīng)對(duì)照組，正反應(yīng)對(duì)照組為Acholeplasma laidlawii (ATCC 23206) 與M. arginini (ATCC 23838)。負(fù)反應(yīng)對(duì)照組為待測(cè)細(xì)胞之新鮮培養(yǎng)基。
支原體培養(yǎng)檢驗(yàn)操作程序
一、接收標(biāo)本：標(biāo)本與檢驗(yàn)單查對(duì)正確，標(biāo)本質(zhì)量合格。
二、標(biāo)本處理：接種Uu、Mh 培養(yǎng)藥敏一體試劑盒：操作前將所需試劑取出置室溫30 分鐘。1、A 排第一孔加入培養(yǎng)液100μL 作為陰性對(duì)照；2、將標(biāo)本拭子直接放入培養(yǎng)液中充分振蕩并在瓶壁擠干拭子，若為男性尿液取離心沉淀物150μL 或陽性標(biāo)本取50μL 于培養(yǎng)液中混勻。3、將混有標(biāo)本的培養(yǎng)液各100μL 加入A 排余下及B 排各孔中；4、各孔加礦物油覆蓋，置于37℃溫箱培養(yǎng)。
第24、48 小時(shí)分別觀察記錄結(jié)果。結(jié)果判斷原理：培養(yǎng)基含有相應(yīng)支原體生長(zhǎng)所需的蛋白質(zhì)、馬血清、生長(zhǎng)因子、底物及酚紅指示劑，當(dāng)有支原體生長(zhǎng)時(shí)，底物被分解，使PH 值升高，培養(yǎng)基由橙黃色變成紅色，且清亮為陽性。培養(yǎng)基不變色為陰性。B1 孔陽性為解脲支原體陽性；B2孔陽性為人型支原體陽性。藥敏孔A 排為高濃度，B 排為低濃度，變紅則耐藥，不變紅示敏感而不生長(zhǎng)。當(dāng)高濃度與低濃度兩孔均不生長(zhǎng)(不變色)為該藥敏感；高濃度不變色低濃度變紅為該藥物中介；高濃度與低濃度均變紅為該藥物耐藥。
結(jié)果一：第24 小時(shí)B1 孔由橙黃色變成紅色示解脲支原體陽性，藥敏看結(jié)果判斷；第24 小時(shí)、48 小時(shí)觀察B2 孔均不變色，示無人型支原體生長(zhǎng)或濃度極低，報(bào)告培養(yǎng)出解脲支原體，未培養(yǎng)出人型支原體。
結(jié)果二：第24 小時(shí)B1 孔由橙黃色變成紅色示解脲支原體陽性，藥敏看結(jié)果判斷；第48 小時(shí)觀察B2 孔由橙黃色變成紅色示人型支原體陽性，藥敏看結(jié)果判斷，報(bào)告培養(yǎng)出解脲支原體與人型支原體附藥敏結(jié)果。
結(jié)果三：陽性對(duì)照孔由橙黃色變成紅色示支原體陽性，藥敏看結(jié)果判斷；第24 小時(shí)、48 小時(shí)觀察B1 孔、B2 孔均不變色，示無解脲、人型支原體生長(zhǎng)或濃度極低，報(bào)告培養(yǎng)出非解脲、人型支原體或囑病人重留標(biāo)本復(fù)查。
結(jié)果四：第24、48 小時(shí)觀察B1 孔、B2 孔均不變色，示無支原體生長(zhǎng)或濃度極低，報(bào)告未培養(yǎng)出解脲及
結(jié)果五：第24 小時(shí)B1 孔不變色示解脲支原體陰性；第48 小時(shí)觀察B2 孔由橙黃色變成紅色示人型支原體陽性，藥敏看結(jié)果判斷。報(bào)告未培養(yǎng)出解脲支原體，培養(yǎng)出人型支原體附藥敏結(jié)果。
支原體生長(zhǎng)較慢，所以先在液體培養(yǎng)基培養(yǎng)1~2周增殖后，再培養(yǎng)于agar plate上。需至少培養(yǎng)3星期后，才可斷定是否有支原體污染。所以整個(gè)測(cè)試需5個(gè)星期才知正確結(jié)果