選擇怎樣的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞是一件令人糾結的工作。選擇已發(fā)表文章中用的培養(yǎng)基?補充添加物或額外營養(yǎng)來優(yōu)化培養(yǎng)基?還是購買商業(yè)化的配套培養(yǎng)基?最重要的是,要了解不同的培養(yǎng)基會影響你的原代細胞培養(yǎng)及后續(xù)研究。
許多研究人員通常使用經(jīng)典培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞系,這類培養(yǎng)基足夠用于細胞系的培養(yǎng)。但原代細胞往往需要額外的營養(yǎng)才能有良好的性狀。細胞系和原代細胞之間存在差異,這些差異影響細胞對營養(yǎng)的需求。比如:細胞系增殖能力很強,很好地適合于2維培養(yǎng),對培養(yǎng)條件的要求寬松。與此相反,原代細胞分離自3維生長的宿主組織,然后轉移到2維環(huán)境中培養(yǎng),所以有著更為復雜的營養(yǎng)需求。此外,原代細胞比細胞系的增值能力弱,隨著培養(yǎng)時間的推移,原代細胞會越來越衰老,而且原代細胞壽命也短。由于這些差異,特殊培養(yǎng)基往往是原代細胞培養(yǎng)的一個更好的選擇。
特殊培養(yǎng)基為每種特定的細胞類型進行了優(yōu)化,通常比傳統(tǒng)培養(yǎng)基更復雜。特殊培養(yǎng)基通常被設計為低濃度血清或者無血清,因此培養(yǎng)基需要額外補充生長因子、脂肪和激素。這種通過添加特定的組分,可以使培養(yǎng)基的組分和濃度得到優(yōu)化,從而用于培養(yǎng)特定類型的細胞。
為了要說明不同的基礎培養(yǎng)基和添加物對您的原代細胞培養(yǎng)產生影響,我們做了一個簡單的實驗。我們以不易培養(yǎng)的人真皮微血管內皮細胞原代細胞為例。分別在適于人真皮微血管內皮細胞培養(yǎng)的DMEM/F12基礎培養(yǎng)基中和Sciencell優(yōu)化的特殊培養(yǎng)基(ECM;Cat# 1001)進行細胞培養(yǎng)并比較。此外,我們觀察和比較了高濃度血清(FBS 10%)與低濃度血清(FBS 5%)+內皮細胞生長添加物(ECGS;Cat# 1052,含有混合激素和生長因子)對內皮細胞培養(yǎng)的影響。
雖然最開始的細胞接種密度相同,但細胞在不同培養(yǎng)基中的生長狀況非常不同。我們觀察到:1.在DMEM / F12培養(yǎng)細胞的過程中,添加5%FBS和ECGS的組合比與10%FBS生長更快。我們還觀察到細胞在這些條件下與內皮細胞培養(yǎng)基生長有相似的趨勢。這表明低濃度血清+生長因子和激素組合對內皮細胞增殖更有利。2.比較不同基礎培養(yǎng)基都添加5%FBS和ECGS后對細胞生長的影響。結果與DMEM / F12相比,ECM培養(yǎng)細胞不僅生長更快,而且具有更緊湊的形態(tài)。
這些研究結果并不限于微血管內皮細胞。我們使用大血管內皮細胞進行了相同的實驗,獲得了類似的結果。總之,這些圖顯示了優(yōu)化后的專用培養(yǎng)基+補充劑對原代細胞生長具有更為有利和顯著的影響。請記住,您培養(yǎng)的原代細胞越健康,您的結果才越接近真實的狀況。
總之,考慮原代細胞與細胞系直接存在明顯區(qū)別,原代細胞的生長需要更為復雜,所以選擇最適合培養(yǎng)基去培養(yǎng)才能保證細胞的良好狀態(tài)。